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[求助]
酶活測(cè)試求助 已有1人參與
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請(qǐng)問有了解酶偶聯(lián)反應(yīng)法的小伙伴嗎？ 測(cè)目標(biāo)酶活的時(shí)候需要加入工具酶輔助耦聯(lián)，但是，請(qǐng)問怎么樣才能保證多次試驗(yàn)中工具酶活性的一致性呢？ 沒有購買商品酶，這個(gè)工具酶每次都是現(xiàn)用現(xiàn)養(yǎng)菌提的，用之前會(huì)測(cè)有沒有活性。這樣的話多次測(cè)目標(biāo)酶活的時(shí)候，沒有辦法保證工具酶的活性都是一致的，有小伙伴有類似的經(jīng)驗(yàn)嗎？求大神指點(diǎn)�。�！ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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卷卷康小西: 金幣+20, ★★★很有幫助 2020-02-28 22:09:33
卷卷康小西: 金幣+20, ★★★很有幫助 2020-02-28 22:09:33
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1：能把蛋白純化出來后冷凍分裝嗎？這樣可以每次加入相同的酶，保證實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性 2：偶聯(lián)測(cè)蛋白活性，一般都是把輔助反應(yīng)設(shè)為過量（即過量的酶，過量的底物），保證要測(cè)的酶的活性不受到輔助酶反應(yīng)的影響 例如： ATP-NADH 經(jīng)常用于ATP消耗系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)，ATP，磷酸烯醇式丙酮酸，NADH及ＰK/LDH酶加入，保證消耗的ATP能迅速被再生，PK/LDH酶在過量的情況下，多加少加對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響是有限的。 |
2樓2020-02-24 11:00:19
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