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[求助]
酶活測試求助 已有1人參與
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請問有了解酶偶聯(lián)反應(yīng)法的小伙伴嗎？ 測目標酶活的時候需要加入工具酶輔助耦聯(lián)，但是，請問怎么樣才能保證多次試驗中工具酶活性的一致性呢？ 沒有購買商品酶，這個工具酶每次都是現(xiàn)用現(xiàn)養(yǎng)菌提的，用之前會測有沒有活性。這樣的話多次測目標酶活的時候，沒有辦法保證工具酶的活性都是一致的，有小伙伴有類似的經(jīng)驗嗎？求大神指點�。�！ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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卷卷康小西: 金幣+20, ★★★很有幫助 2020-02-28 22:09:33
卷卷康小西: 金幣+20, ★★★很有幫助 2020-02-28 22:09:33
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1：能把蛋白純化出來后冷凍分裝嗎？這樣可以每次加入相同的酶，保證實驗的可重復(fù)性 2：偶聯(lián)測蛋白活性，一般都是把輔助反應(yīng)設(shè)為過量（即過量的酶，過量的底物），保證要測的酶的活性不受到輔助酶反應(yīng)的影響 例如： ATP-NADH 經(jīng)常用于ATP消耗系統(tǒng)的實驗，ATP，磷酸烯醇式丙酮酸，NADH及ＰK/LDH酶加入，保證消耗的ATP能迅速被再生，PK/LDH酶在過量的情況下，多加少加對實驗的影響是有限的。 |
2樓2020-02-24 11:00:19
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