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細胞培養(yǎng)中常見的污染情況及解決方法
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細胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型有細菌污染、霉菌污染、支原體污染、黑膠蟲污染、真菌污染、原蟲污染等。它們在細胞培養(yǎng)中污染的特點以及相應的解決方法如下： 1. 細菌：細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀，根據感染細菌的不同，可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會渾濁變黃，對細胞生長影響明顯。 解決方法：仔細檢查一下器皿的滅菌情況，是否在高壓滅菌時放氣時間足夠，壓力足夠！尤其是和儲存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品，連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲存液污染，一定要注意！下次使用前檢查一下培養(yǎng)液是否存在渾濁的現象！可在培養(yǎng)液中加相應的抗生素處理，如四環(huán)素，慶大霉素，或者鏈霉素。 2. 霉菌：培養(yǎng)液是清亮的，倒置顯微鏡下無雜質，37度孵箱培養(yǎng)2-3天，仍清亮，但出現絮狀雜質，鏡下可見呈細絲狀的團狀漂浮物，可看到明顯的菌絲，細胞仍可生長，但時間長之后，細胞的活力狀態(tài)變差。 解決方法：用硫酸銅溶液擦拭CO₂孵箱內，再把水盤里也加上飽和量的硫酸銅�；蛘咴谂囵B(yǎng)箱的托盤加入飽和的消毒磷酸氫二鈉高鹽液體,可以防止霉菌污染。 CO₂孵箱被霉菌污染后，可把所有細胞暫時轉移，采用過氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把過氧乙酸放置在孵箱內一個小時，使其蒸汽彌漫。待過氧乙酸的氣味消散后，再移入細胞。孵箱應定期清潔（2月左右），尤其在多雨的季節(jié)。 其它培養(yǎng)箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外燈照。 預防霉菌污染，可在培養(yǎng)基里加3u/ml的兩性霉素或制霉菌素或放線菌素D或雙抗；但細胞一旦污染，很難挽救，制霉菌素或放線菌素D或雙抗都于事無補，建議舍棄該污染細胞。，將環(huán)境徹底消毒，如果所有細胞都污染，可能是系統(tǒng)污染，檢查一下培養(yǎng)基和器材，如果只是個別污染，可能是操作問題，就要注意操作 3. 支原體：黑色的，好象多為多形，培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會渾濁，原體感染，國內血清很多都沒有做支原體陰性檢測，而支原體是牛血清中最常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感染細胞以后，細胞病變不很明顯，只是慢慢死去。 解決方法：支原體污染細胞后，特別是重要的細胞株，有必要清除支原體，常用方法有：抗生素處理、抗血清處理、抗生素加抗血清和補體聯(lián)合處理。要注意的是：支原體沒有細胞壁，故作用于細胞壁生物合成的抗生素，如內酰胺類、萬古霉素等是不敏感的；對多粘菌素、利福平、磺胺藥物普遍耐火藥。對支原體最有抑制活性抗生素是四環(huán)素類、大環(huán)內酯類等，氨基糖苷類、氯霉素對支原體有較小的抑制作用。必要時更換所有培養(yǎng)用物。通常，濾過除菌的方法對支原體是沒有作用的。 4. 黑蛟蟲：可以穿透濾膜，也可以通過空氣傳播，低倍下為黑色點狀，高倍下可看見黑色的小蟲游來游去，培養(yǎng)液也是不渾的，一般不會太影響，細胞還是可以用的。常常是細胞生長狀態(tài)良好，且觀測到的運動物無明顯增多，且培養(yǎng)液顏色、透明度無明顯變化，可在同一批號的血清養(yǎng)的細胞中發(fā)現類似現象。 解決方法：對細胞生長狀態(tài)不會有明顯影響，在細胞增殖旺盛之后會自然消失，除更換血清外無須特殊處理。建議如果細胞有可能是此種污染的話，可以增加細胞的種板密度，以提高細胞的生存率。 5. 真菌：一般培養(yǎng)液清亮，不變色，鏡下有絲狀物，有些真菌開始很像死細胞碎片，只是它很多很多的小塊很清楚，象珊瑚狀，不象細胞碎片分不清，慢慢的會長出很細的黑色絲狀物。真菌生長的比較慢，不象細菌那么容易被發(fā)現，但是一旦發(fā)現有它的存在細胞就被污染了，也很難救活了。 解決方法：果斷扔掉，然后徹底消毒滅菌培養(yǎng)間，CO₂孵箱，器皿和培養(yǎng)液。 6. 原蟲：培養(yǎng)液可輕微渾濁，顯微鏡下那些細小的點狀物數量非常多，輕微活動，細胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢，而且細胞狀態(tài)不好，邊緣不清楚，細胞不透亮。它們與細胞可共生但會與細胞爭奪營養(yǎng)。這種共生是非常普遍的，但它們的數量小，細胞占優(yōu)勢所以不會影響到細胞的正常生長，只有當它們到達一定的數量時就會影響到細胞的生長，最終形成惡性循環(huán)。 解決方法：污染的可能原因很多，比如配液消毒問題、操作問題、環(huán)境問題等等，如果細胞很多的話，直接扔了重新復蘇細胞，如果是保種細胞的話，可購買相關的滅菌試劑。 |
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簡單回復
tzynew2樓
2020-01-13 08:54
回復
艾柏森生物(金幣+1): 謝謝參與
9 發(fā)自小木蟲Android客戶端
2020-01-13 10:16
回復
艾柏森生物(金幣+1): 謝謝參與
嗯 發(fā)自小木蟲Android客戶端
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