 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 12 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3297 | 回復(fù): 11 | |||
[交流]
細(xì)胞培養(yǎng)中常見的污染情況及解決方法
|
|||
|
細(xì)胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型有細(xì)菌污染、霉菌污染、支原體污染、黑膠蟲污染、真菌污染、原蟲污染等。它們在細(xì)胞培養(yǎng)中污染的特點(diǎn)以及相應(yīng)的解決方法如下： 1. 細(xì)菌：細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀，根據(jù)感染細(xì)菌的不同，可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁變黃，對細(xì)胞生長影響明顯。 解決方法：仔細(xì)檢查一下器皿的滅菌情況，是否在高壓滅菌時(shí)放氣時(shí)間足夠，壓力足夠！尤其是和儲(chǔ)存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品，連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲(chǔ)存液污染，一定要注意！下次使用前檢查一下培養(yǎng)液是否存在渾濁的現(xiàn)象！可在培養(yǎng)液中加相應(yīng)的抗生素處理，如四環(huán)素，慶大霉素，或者鏈霉素。 2. 霉菌：培養(yǎng)液是清亮的，倒置顯微鏡下無雜質(zhì)，37度孵箱培養(yǎng)2-3天，仍清亮，但出現(xiàn)絮狀雜質(zhì)，鏡下可見呈細(xì)絲狀的團(tuán)狀漂浮物，可看到明顯的菌絲，細(xì)胞仍可生長，但時(shí)間長之后，細(xì)胞的活力狀態(tài)變差。 解決方法：用硫酸銅溶液擦拭CO₂孵箱內(nèi)，再把水盤里也加上飽和量的硫酸銅。或者在培養(yǎng)箱的托盤加入飽和的消毒磷酸氫二鈉高鹽液體,可以防止霉菌污染。 CO₂孵箱被霉菌污染后，可把所有細(xì)胞暫時(shí)轉(zhuǎn)移，采用過氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把過氧乙酸放置在孵箱內(nèi)一個(gè)小時(shí)，使其蒸汽彌漫。待過氧乙酸的氣味消散后，再移入細(xì)胞。孵箱應(yīng)定期清潔（2月左右），尤其在多雨的季節(jié)。 其它培養(yǎng)箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外燈照。 預(yù)防霉菌污染，可在培養(yǎng)基里加3u/ml的兩性霉素或制霉菌素或放線菌素D或雙抗；但細(xì)胞一旦污染，很難挽救，制霉菌素或放線菌素D或雙抗都于事無補(bǔ)，建議舍棄該污染細(xì)胞。，將環(huán)境徹底消毒，如果所有細(xì)胞都污染，可能是系統(tǒng)污染，檢查一下培養(yǎng)基和器材，如果只是個(gè)別污染，可能是操作問題，就要注意操作 3. 支原體：黑色的，好象多為多形，培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁，原體感染，國內(nèi)血清很多都沒有做支原體陰性檢測，而支原體是牛血清中最常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感染細(xì)胞以后，細(xì)胞病變不很明顯，只是慢慢死去。 解決方法：支原體污染細(xì)胞后，特別是重要的細(xì)胞株，有必要清除支原體，常用方法有：抗生素處理、抗血清處理、抗生素加抗血清和補(bǔ)體聯(lián)合處理。要注意的是：支原體沒有細(xì)胞壁，故作用于細(xì)胞壁生物合成的抗生素，如內(nèi)酰胺類、萬古霉素等是不敏感的；對多粘菌素、利福平、磺胺藥物普遍耐火藥。對支原體最有抑制活性抗生素是四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類等，氨基糖苷類、氯霉素對支原體有較小的抑制作用。必要時(shí)更換所有培養(yǎng)用物。通常，濾過除菌的方法對支原體是沒有作用的。 4. 黑蛟蟲：可以穿透濾膜，也可以通過空氣傳播，低倍下為黑色點(diǎn)狀，高倍下可看見黑色的小蟲游來游去，培養(yǎng)液也是不渾的，一般不會(huì)太影響，細(xì)胞還是可以用的。常常是細(xì)胞生長狀態(tài)良好，且觀測到的運(yùn)動(dòng)物無明顯增多，且培養(yǎng)液顏色、透明度無明顯變化，可在同一批號的血清養(yǎng)的細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)類似現(xiàn)象。 解決方法：對細(xì)胞生長狀態(tài)不會(huì)有明顯影響，在細(xì)胞增殖旺盛之后會(huì)自然消失，除更換血清外無須特殊處理。建議如果細(xì)胞有可能是此種污染的話，可以增加細(xì)胞的種板密度，以提高細(xì)胞的生存率。 5. 真菌：一般培養(yǎng)液清亮，不變色，鏡下有絲狀物，有些真菌開始很像死細(xì)胞碎片，只是它很多很多的小塊很清楚，象珊瑚狀，不象細(xì)胞碎片分不清，慢慢的會(huì)長出很細(xì)的黑色絲狀物。真菌生長的比較慢，不象細(xì)菌那么容易被發(fā)現(xiàn)，但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細(xì)胞就被污染了，也很難救活了。 解決方法：果斷扔掉，然后徹底消毒滅菌培養(yǎng)間，CO₂孵箱，器皿和培養(yǎng)液。 6. 原蟲：培養(yǎng)液可輕微渾濁，顯微鏡下那些細(xì)小的點(diǎn)狀物數(shù)量非常多，輕微活動(dòng)，細(xì)胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢，而且細(xì)胞狀態(tài)不好，邊緣不清楚，細(xì)胞不透亮。它們與細(xì)胞可共生但會(huì)與細(xì)胞爭奪營養(yǎng)。這種共生是非常普遍的，但它們的數(shù)量小，細(xì)胞占優(yōu)勢所以不會(huì)影響到細(xì)胞的正常生長，只有當(dāng)它們到達(dá)一定的數(shù)量時(shí)就會(huì)影響到細(xì)胞的生長，最終形成惡性循環(huán)。 解決方法：污染的可能原因很多，比如配液消毒問題、操作問題、環(huán)境問題等等，如果細(xì)胞很多的話，直接扔了重新復(fù)蘇細(xì)胞，如果是保種細(xì)胞的話，可購買相關(guān)的滅菌試劑。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
歡迎211本科同學(xué)，過A區(qū)國家線，A區(qū)非偏遠(yuǎn)一本，交叉學(xué)科課題組
已經(jīng)有24人回復(fù)
-
新疆大學(xué)地質(zhì)與礦業(yè)工程學(xué)院招生
已經(jīng)有10人回復(fù)
-
招調(diào)劑
已經(jīng)有11人回復(fù)
-
0856材料與化工求調(diào)劑！
已經(jīng)有11人回復(fù)
-
材料與化工304求調(diào)劑
已經(jīng)有10人回復(fù)
-
A區(qū)一本交叉課題組，低分調(diào)劑，招收機(jī)械電子信息通信等交叉方向
已經(jīng)有31人回復(fù)
-
中科大材料299求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
301求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
材料考研339求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
材料專碩290求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 搶金幣啦！回帖就可以得到:
-
[求助]日本動(dòng)漫里用手表和三角板測經(jīng)緯度是怎么回事？
+1/189
-
中科院強(qiáng)磁場中心高薪誠聘博士后（有機(jī)化學(xué)）
+3/95
-
長期招收有色金屬、稀土、固體氧化物燃料電池等領(lǐng)域碩士和博士研究生
+1/87
-
北京信息科技大學(xué)聯(lián)合清華大學(xué)某國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，聯(lián)合培養(yǎng)碩生、博生，并長期招博士后
+1/86
-
江西南部某一本高校招收環(huán)境、生物、計(jì)算機(jī)、農(nóng)業(yè)等專業(yè)調(diào)劑生
+1/84
-
華中科技大學(xué)牛廣達(dá)教授招聘博士后
+1/16
-
招博士，申請考核制，環(huán)境化學(xué)、環(huán)境毒理/健康方向
+1/16
-
河南大學(xué)張琳教授團(tuán)隊(duì)招收博士研究生
+1/15
-
加拿大卡爾頓大學(xué)【招博后】【心理學(xué)人工智能】
+1/11
-
濟(jì)南大學(xué)耿兵氟化學(xué)課題組現(xiàn)招收2026級化學(xué)工程學(xué)碩專碩共4名
+1/8
-
中國科學(xué)院國家級人才團(tuán)隊(duì)博士后招聘啟示
+1/6
-
歡迎報(bào)考中山大學(xué)課題組，提供2026級碩士研究生名額
+1/6
-
有可以進(jìn)行大分子分子量檢測的服務(wù)單位請私信，有樣品需要委托檢測。
+1/6
-
復(fù)試可能過不了想調(diào)劑
+1/4
-
120202南京大學(xué)企業(yè)管理求調(diào)劑
+1/3
-
博士招生 福建農(nóng)林大學(xué) 生物質(zhì)化學(xué)工程與機(jī)能材料團(tuán)隊(duì)招收申請博士1名
+1/2
-
青島科技大學(xué)高分子學(xué)院老師招收碩士生2名
+1/2
-
26屆計(jì)算機(jī)、電子信息類、電科、控制、通信考研T j信息pp駿：74+08+76+6+20
+1/1
-
北京理工大學(xué)（珠海校區(qū)）何治宇教授團(tuán)隊(duì)招收26級博士生1 名 （第二批）
+1/1
-
緊急博士招生 福建農(nóng)林大學(xué) 生物質(zhì)化學(xué)工程與機(jī)能材料團(tuán)隊(duì)招收申請博士1名
+1/1
4樓2020-01-13 13:23:07
6樓2020-01-15 08:53:34
7樓2020-03-17 15:11:56
8樓2020-08-24 12:27:51
簡單回復(fù)
tzynew2樓
2020-01-13 08:54
回復(fù)
艾柏森生物(金幣+1): 謝謝參與
9 發(fā)自小木蟲Android客戶端
2020-01-13 10:16
回復(fù)
艾柏森生物(金幣+1): 謝謝參與
嗯 發(fā)自小木蟲Android客戶端
2020-01-14 08:36
回復(fù)
艾柏森生物(金幣+1): 謝謝參與
nono20099樓
2021-10-08 14:12
回復(fù)
·
刀劈三關(guān)10樓
2021-10-08 16:42
回復(fù)
艾柏森生物(金幣+1): 謝謝參與
nono200911樓
2021-10-09 07:48
回復(fù)
艾柏森生物(金幣+1): 謝謝參與
·
刀劈三關(guān)12樓
2021-10-09 21:16
回復(fù)
。
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 艾柏森生物 的主題更新
| 12 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 080500材料科學(xué)與工程 +13 | 202114020319 2026-03-03 | 13/650 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考博] 26申博-目前4篇SCI一作 +4 | chen_2024 2026-03-02 | 4/200 |
|
|
|
[基金申請]
 本子寫完了，給DS兄弟看了，得了92分
+6
|
Doma 2026-03-01 | 10/500 |
|
|
[考研] 0703化學(xué) 學(xué)碩 理工科均可 不區(qū)分研究方向 總分279求調(diào)劑 +7 | 1一11 2026-03-03 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 070300化學(xué) 280 一志愿太原理工 求調(diào)劑 +8 | 拾玖壹 2026-03-04 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 376求調(diào)劑 +3 | 王浩然sam 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑材料學(xué)碩 +6 | 詞凝Y 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 322分 085600求調(diào)劑，有互聯(lián)網(wǎng)+國金及主持省級大創(chuàng)經(jīng)歷 +6 | 熊境喆 2026-03-04 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0855機(jī)械工程324求調(diào)劑 +3 | 鄭SK 2026-03-02 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +4 | 熬夜的貓頭鷹 2026-03-02 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿中科大080500總分324求調(diào)劑 +3 | jorna 2026-03-03 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 化工專碩調(diào)劑 +4 | 利好利好. 2026-03-03 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料工程求調(diào)劑 +3 | 1431251 2026-03-03 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +6 | wyyyqx 2026-03-01 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑 +7 | axyz3 2026-02-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 306分材料調(diào)劑 +5 | chuanzhu川燭 2026-03-01 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 275求調(diào)劑 +7 | 明遠(yuǎn)求學(xué) 2026-03-01 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 291 求調(diào)劑 +3 | 化工2026屆畢業(yè)?/a> 2026-03-02 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿鄭大材料學(xué)碩298分，求調(diào)劑 +6 | wsl111 2026-03-01 | 6/300 |
|
|
|
[考研]
尋找調(diào)劑
+4
|
LYidhsjabdj 2026-02-28 | 4/200 |
|