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yedansky新蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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[交流]
蛋白可溶性表達(dá) 無(wú)活性
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有沒(méi)有可能 大腸桿菌在OD600 0.4-0.6 誘導(dǎo)時(shí)，少量表達(dá)的可溶性蛋白 有很高的活性 但OD600 值在0.7-0.8或者更高，雖然為可溶性表達(dá)，但是無(wú)活性，有人有這種情況么 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
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yedansky
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9樓2020-01-17 09:09:53
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2樓2020-01-10 16:01:09
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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
西門(mén)吹雪170: 金幣+5, 鼓勵(lì)熱心回帖交流 2020-01-18 20:28:23
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
西門(mén)吹雪170: 金幣+5, 鼓勵(lì)熱心回帖交流 2020-01-18 20:28:23
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關(guān)系應(yīng)該不大。 1. 首先蛋白可溶并不代表蛋白處于天然結(jié)構(gòu)，它可以是可溶性多聚體，也可以是多種結(jié)構(gòu)的混合物，雖然沒(méi)有沉淀，但有可能活性位點(diǎn)被包埋或活性位點(diǎn)的氨基酸側(cè)鏈空間位置變化而沒(méi)有活性，這跟蛋白性質(zhì)有關(guān)，所以即使可溶活性也可能很低甚至無(wú)活性。 2. 蛋白可能存在必要的修飾才有活性，原核表達(dá)系統(tǒng)無(wú)法完成，查文獻(xiàn)自行確認(rèn)。 3. 缺乏輔因子，查文獻(xiàn)自行確認(rèn)。 建議純化以后跑一下HPLC，先確認(rèn)樣品是否為單一結(jié)構(gòu)。另外，確認(rèn)一下序列里有沒(méi)有cys，如果有確認(rèn)cys是形成二硫鍵還是參與金屬離子配位的，如果沒(méi)有嘗試融合不同標(biāo)簽表達(dá)。 總之，優(yōu)先嘗試通過(guò)可溶表達(dá)獲得天然構(gòu)象的蛋白，不行嘗試復(fù)性。 |
3樓2020-01-10 17:09:02
匿名
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4樓2020-01-10 19:41:40
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