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乳酸菌電轉(zhuǎn)后不長(zhǎng)是什么原因？ 已有1人參與
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感受態(tài)制備：向感受態(tài)制備培養(yǎng)基（2%甘氨酸+MRS培養(yǎng)基）中，按5%接種量加入過(guò)夜培養(yǎng)的保加利亞乳桿菌菌液。37℃靜置培養(yǎng)，OD600達(dá)到0.4-0.6，冰浴30min，5000g 10min收集菌體；用10ml預(yù)冷washing buffer（0.3M蔗糖+5mM KH2PO4+2mM MgCl2）重懸，5000g 10min收集菌體（該步驟重復(fù)兩次），使用電擊緩沖液清洗（0.3M蔗糖+10%甘油）兩次，添加菌液原體積1%w電擊緩沖液重懸菌體，分裝成100μl每管。 電轉(zhuǎn)：向感受態(tài)細(xì)胞中加入1μg待轉(zhuǎn)質(zhì)粒，轉(zhuǎn)移到電擊杯中，電擊條件:2000V 200Ω 25μF，電轉(zhuǎn)完成后冰浴10min，加入無(wú)抗感受態(tài)復(fù)蘇培養(yǎng)基（20mM MgCl2+2mM CaCl2+0.3M蔗糖+MRS培養(yǎng)基），28℃復(fù)蘇 4h。8000g離心棄去大部分上清，重懸菌體，涂布于抗性平板（紅霉素2μg/ml）上，28℃倒置培養(yǎng)。 載體為溫敏型質(zhì)粒，28℃下穩(wěn)定復(fù)制。 請(qǐng)各位大佬分析一下可能有什么原因 |
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蔗糖質(zhì)量不夠好 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2019-10-28 10:50:16
3樓2019-10-28 11:37:12
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myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰手有余香，分子生物版感謝您的關(guān)注與支持。 2019-10-29 13:28:47
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我一般最低用sigma的，400元每100g的，國(guó)產(chǎn)的我連配培養(yǎng)基都不用 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2019-10-28 14:36:59
王超福瑞達(dá)
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 153.5
- 帖子: 6
- 在線: 10.2小時(shí)
- 蟲號(hào): 20380045
- 注冊(cè): 2020-01-03
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
5樓2020-03-31 16:16:09
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