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MCzyk新蟲 (初入文壇)
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[交流]
！��！求助大佬~檢測(cè)基因敲入的基因組PCR（genome PCR
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引物設(shè)計(jì)在敲入位點(diǎn)同源臂的上、下游，之前流式檢測(cè)出的敲入成功率大概是10%，我是進(jìn)行分選富集之后提基因組檢測(cè)的，如果敲入成功應(yīng)擴(kuò)增出約4600bp的片段，如果沒敲入成功應(yīng)擴(kuò)增出約1800bp的片段，由于敲入率低，因此兩個(gè)長(zhǎng)度的條帶理論上都應(yīng)該P(yáng)出來。但實(shí)際我只P出了1800bp的片段，4600bp的片段偶爾能隱約看到但沒有說服力，這可能是PCR產(chǎn)物長(zhǎng)度差異過大加上敲入率低導(dǎo)致的。所以想求教各位大佬，這種情況該怎么優(yōu)化PCR條件才能把長(zhǎng)片段P出來？？？先謝過大家了！��！ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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woshishui916
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如果有帶，可以做個(gè)二次擴(kuò)增，然后測(cè)序驗(yàn)證序列。都正確劉應(yīng)該是成功了 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2019-10-21 21:16:51
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