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Azure成像讓蛋白質(zhì)磷酸化清晰可見
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WB 是檢測和定量磷酸化蛋白質(zhì)的重要實驗方法,然而大家一直都說磷酸化蛋白 WB 不好做!WB 磷酸化蛋白曝不出條帶的時候,會特別沮喪。 Azure君在此給大家列出幾點小建議,希望能幫助您改善一下實驗結(jié)果。 1、樣本是否表達(dá): 查閱資料或通過預(yù)實驗確定。 2、對照設(shè)置: 陽性和陰性對照。 總蛋白抗體對照,對于特定時間的特定樣品,磷酸化和非磷酸化蛋白質(zhì)的總和代表該特定蛋白質(zhì)的總量。在相同的 WB 檢測中, 磷酸化蛋白質(zhì)的量增加通常伴隨著非磷酸化蛋白質(zhì)的降低。 3、內(nèi)參設(shè)置: 根據(jù)實驗選擇合適的內(nèi)參,如Actin、GAPDH 等 4、適當(dāng)?shù)奶崛》椒ǎ?br /> 蛋白質(zhì)提取的方法不僅影響提取效率,還會影響蛋白的質(zhì)量。建議采用裂解液裂解和超聲破碎組合的方式,可確保整個樣本充分裂解。 5、低溫操作: 室溫條件下,磷酸化蛋白很容易被蛋白磷酸酶降解。請勿反復(fù)凍融,操作時一定置于冰上。 |
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