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Azure成像讓蛋白質(zhì)磷酸化清晰可見
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WB 是檢測(cè)和定量磷酸化蛋白質(zhì)的重要實(shí)驗(yàn)方法，然而大家一直都說磷酸化蛋白 WB 不好做！WB 磷酸化蛋白曝不出條帶的時(shí)候，會(huì)特別沮喪。 Azure君在此給大家列出幾點(diǎn)小建議，希望能幫助您改善一下實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 1、樣本是否表達(dá)： 查閱資料或通過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定。 2、對(duì)照設(shè)置： 陽性和陰性對(duì)照。 總蛋白抗體對(duì)照，對(duì)于特定時(shí)間的特定樣品，磷酸化和非磷酸化蛋白質(zhì)的總和代表該特定蛋白質(zhì)的總量。在相同的 WB 檢測(cè)中， 磷酸化蛋白質(zhì)的量增加通常伴隨著非磷酸化蛋白質(zhì)的降低。 3、內(nèi)參設(shè)置： 根據(jù)實(shí)驗(yàn)選擇合適的內(nèi)參，如Actin、GAPDH 等 4、適當(dāng)?shù)奶崛》椒ǎ?br /> 蛋白質(zhì)提取的方法不僅影響提取效率，還會(huì)影響蛋白的質(zhì)量。建議采用裂解液裂解和超聲破碎組合的方式，可確保整個(gè)樣本充分裂解。 5、低溫操作： 室溫條件下，磷酸化蛋白很容易被蛋白磷酸酶降解。請(qǐng)勿反復(fù)凍融，操作時(shí)一定置于冰上。 |
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2019-10-18 11:01:05, 206.57 K
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