 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 3 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1254 | 回復(fù): 2 | |||
[交流]
WB實(shí)驗(yàn)總做不好，那么如何進(jìn)行WB實(shí)驗(yàn)質(zhì)控呢？ 已有2人參與
|
|
做過WB實(shí)驗(yàn)的小伙伴都經(jīng)歷過成像時(shí)忐忑不安，出來結(jié)果時(shí)的彷徨無措，為什么條帶沒有出啦，為什么背景這么高，為什么受傷的總是我，看著旁邊小伙伴漂亮的結(jié)果圖，心生羨慕嫉妒，那么小編給大家整理總結(jié)了如何進(jìn)行WB的質(zhì)控和注意哪些檢查點(diǎn)。 蛋白樣品： 準(zhǔn)備好裂解液后，使用BCA或Bradford等檢測方法仔細(xì)測量蛋白濃度。進(jìn)行上樣時(shí)，確保加入等量的蛋白樣品，以確保公平比較，從而最大限度地減少上樣誤差。不要使凝膠過載！如果您的表達(dá)目標(biāo)非常低，可選擇加樣孔體積大的凝膠，這樣可提高上樣量。 陽性和陰性對(duì)照： 這些質(zhì)控對(duì)于證明您的結(jié)果有效至關(guān)重要。陽性對(duì)照通常是裂解物或組織提取物，其具有過度表達(dá)的蛋白。當(dāng)您的陽性對(duì)照未能發(fā)出信號(hào)時(shí)，您知道該方法可能存在問題。如果您正在使用重組蛋白，那么包含內(nèi)源形式靶標(biāo)的陽性對(duì)照也是一個(gè)好主意。這將有助于理清與一抗相關(guān)的任何特異性問題。陰性對(duì)照同樣也有價(jià)值，通常是不會(huì)產(chǎn)生目標(biāo)的裂解物或組織提取物。最好的陰性對(duì)照由敲除或未處理的細(xì)胞系制備。 內(nèi)參對(duì)照： 有幾種廣泛可用的上樣對(duì)照抗體，如GAPDH，actin 或 tubulin。由于這些蛋白表達(dá)豐度高，因此在適應(yīng)低豐度目標(biāo)的樣品表達(dá)看到內(nèi)參對(duì)照蛋白的過飽非常常見。這里最大的挑戰(zhàn)是內(nèi)參對(duì)照和靶蛋白在相同的樣品稀釋系列中通常具有不同的線性，影響定量的準(zhǔn)確性，對(duì)于目的蛋白表達(dá)比較低的蛋白，可選擇低表達(dá)的內(nèi)參例如Lamin B1和HSP60等蛋白。此外，研究人員需要證明內(nèi)參蛋白的表達(dá)不會(huì)因?qū)嶒?yàn)條件的變化而改變。 |
回復(fù)此樓» 本帖附件資源列表
-
歡迎監(jiān)督和反饋：小木蟲僅提供交流平臺(tái)，不對(duì)該內(nèi)容負(fù)責(zé)。
本內(nèi)容由用戶自主發(fā)布，如果其內(nèi)容涉及到知識(shí)產(chǎn)權(quán)問題，其責(zé)任在于用戶本人，如對(duì)版權(quán)有異議，請(qǐng)聯(lián)系郵箱：xiaomuchong@tal.com - 附件 1 : WB實(shí)驗(yàn)總做不好，那么如何進(jìn)行WB實(shí)驗(yàn)質(zhì)控呢？.pdf
2019-10-15 11:33:47, 167.29 K
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
» 猜你喜歡
環(huán)境工程專碩307 一志愿211 四六級(jí)已過 求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
0855機(jī)械工程324求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
材料復(fù)試調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
080500材料科學(xué)與工程
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
學(xué)碩材料275調(diào)劑
已經(jīng)有9人回復(fù)
-
274求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
307求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
085600材料調(diào)劑 總分330
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
085701環(huán)境工程 求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
送紅花一朵
 |
2樓2020-05-03 10:26:31
soarshining
捐助貴賓 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 142 (高中生)
- 金幣: 988.1
- 散金: 565
- 紅花: 37
- 帖子: 1229
- 在線: 202.7小時(shí)
- 蟲號(hào): 3299181
- 注冊: 2014-06-30
- 專業(yè): 抗腫瘤藥物藥理
3樓2020-05-27 16:02:30
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 liusu05 的主題更新
| 3 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[基金申請(qǐng)]
 成果系統(tǒng)訪問量大，請(qǐng)15分鐘后再嘗試。由此給您造成的不便，敬請(qǐng)諒解。
+12
|
xhuama 2026-03-02 | 13/650 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 281求調(diào)劑 +3 | 我是小小蔥蔥 2026-03-03 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工（高分子）290分求調(diào)劑 +3 | wengyujian 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿西交大材料學(xué)碩 346 求調(diào)劑 +3 | zju51 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿西工大材料學(xué)，英一數(shù)二總分321分，求調(diào)劑。 +3 | zz05zz 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑院校 +6 | 云朵452 2026-03-02 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境工程學(xué)碩288求助調(diào)劑 +7 | 多吃億口芝士 2026-03-02 | 7/350 |
|
|
|
[考博] 26申博 求博導(dǎo) +3 | 愛讀書的小帥 2026-02-28 | 5/250 |
|
|
|
[碩博家園] 2025屆雙非化工碩士畢業(yè)，申博 +4 | 更多的是 2026-02-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 292求調(diào)劑 +3 | sgbl 2026-03-03 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿中科大能動(dòng)297求調(diào)劑，本科川大 +3 | 邵11 2026-03-03 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)0703求調(diào)劑 學(xué)碩 理/工科均可 總分279 +3 | 1一11 2026-03-03 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0857調(diào)劑 +6 | 一ll半 2026-02-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 0854復(fù)試調(diào)劑 276 +5 | wmm9 2026-03-01 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 264求調(diào)劑 +4 | 巴拉巴拉根556 2026-02-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 274求調(diào)劑 +3 | cgyzqwn 2026-03-01 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0856材料求調(diào)劑 +4 | 麻辣魷魚 2026-02-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 313求調(diào)劑 +3 | 水流年lc 2026-02-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +6 | 曼殊2266 2026-02-28 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +3 | 52hz~~ 2026-02-28 | 5/250 |
|