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swatow_yu新蟲 (初入文壇)
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關(guān)于qPCR絕對(duì)定量質(zhì)粒標(biāo)曲模板加量的問題 已有2人參與
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各位師兄師姐,有個(gè)關(guān)于qPCR絕對(duì)定量的問題想請(qǐng)教。 這是一個(gè)用絕對(duì)定量方法,構(gòu)建質(zhì)粒,求得標(biāo)曲,代入待測(cè)樣本Ct值求拷貝量的實(shí)驗(yàn) 的菜鳥實(shí)驗(yàn)。 然后本菜狗被一個(gè)問題繞暈了。希望大佬們解答。 1,質(zhì)粒nanodrop測(cè)得濃度,公式 (6.02×10^9×濃度×10^-9)/(質(zhì)粒bp+連接片段bp)×660 =拷貝數(shù)(copies/μL)。 將上面質(zhì)粒濃度稀釋到10^9copies/μL,因?yàn)閱挝皇莄opies/μL,就開始有點(diǎn)繞不明白 2,體系20μL如下: permix(10μL)、 F引物(0.8μL)、 R引物(0.8μL)、 ROX校正熒光(0.4μL)、 水(6μL)、 待測(cè)模板/標(biāo)曲質(zhì)粒(2μL)。 3,問題是: 整個(gè)標(biāo)曲體系中加了 2μL 的 10^9(copies/μL) ~10^1(copies/μL)的標(biāo)曲質(zhì)粒DNA,那么此刻體系含有的拷貝量就是 2μL x 10^9 copies,那么這一個(gè)梯度的標(biāo)曲體系,它的拷貝量是算作 10^9 還是 2x10^9 ???。。 在畫標(biāo)曲的時(shí)候,這一個(gè)梯度的坐標(biāo)應(yīng)該是 x2μL 還是不 x2μL ,不 x2 的話待測(cè)模板的濃度是不是也不 x2μL。 4,因?yàn)榭戳藙e人的實(shí)驗(yàn)記錄,是體系加2μL的標(biāo)曲質(zhì)粒DNA或者待測(cè)模板,但是標(biāo)曲的拷貝數(shù)坐標(biāo)并沒有 x2, |
新蟲 (著名寫手)
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