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面包樹(shù)129新蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
膠回收后測(cè)序提示有高級(jí)結(jié)構(gòu)
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對(duì)PCR凝膠電泳使用天根生物試劑盒進(jìn)行膠回收，回收后送去測(cè)序，結(jié)果顯示雙鏈有高級(jí)結(jié)構(gòu)，一共測(cè)序4個(gè)樣，3個(gè)樣雙鏈有高級(jí)結(jié)構(gòu)，一個(gè)單鏈有高級(jí)結(jié)構(gòu)。之前不做膠回收直接將pcr樣品測(cè)序，從來(lái)沒(méi)有出現(xiàn)過(guò)這個(gè)情況。請(qǐng)問(wèn)是不是膠回收過(guò)程導(dǎo)致這個(gè)結(jié)果，哪個(gè)步驟容易出現(xiàn)dna結(jié)構(gòu)變化 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶(hù)端 |
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7樓2019-10-10 09:34:18
hooah
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你還真相信這些測(cè)序公司的說(shuō)明？就是做不出來(lái)，給一個(gè)理由而已 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
2樓2019-07-22 12:51:27
longyueling
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| 如果你用PCR樣品送到公司測(cè)序，公司會(huì)跑膠分離回收，由于生物公司做膠回收技術(shù)成熟且用的試劑也不差，所以結(jié)果會(huì)比較理想。您自己回收存在高級(jí)結(jié)構(gòu)的問(wèn)題可能是由于您技術(shù)不嫻熟，中間存在引入高級(jí)結(jié)構(gòu)的步驟以及DNA被污染的風(fēng)險(xiǎn)，而且國(guó)產(chǎn)的試劑難免效果沒(méi)有進(jìn)口的好。建議您這邊做完膠回收后用1uL的樣品跑個(gè)鑒定膠，確定你回收的樣品大小和濃度合適你在寄到公司去。 |
3樓2019-08-07 16:30:40
面包樹(shù)129
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最近又進(jìn)行了兩次實(shí)驗(yàn)，膠回收之后跑電泳條帶很亮位置也正常，送樣測(cè)序后顯示27 F的單鏈全是高級(jí)結(jié)構(gòu)，懷疑是不是引物的問(wèn)題，如果引物稀釋沒(méi)有使用新打的去離子水，會(huì)有這么大的影響嗎？另外引物干粉有可能超過(guò)1年了，但是反向引物也是同時(shí)合成的呀，為什么反向的測(cè)序結(jié)果正常呢，焦頭爛額中，還望您不吝賜教，謝謝。另外我們PCR的體系是50微升的，從電泳條帶亮度看這個(gè)量回收得到的產(chǎn)物濃度沒(méi)有問(wèn)題 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶(hù)端 |
4樓2019-08-19 11:37:09
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