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面包樹(shù)129新蟲 (小有名氣)
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[交流]
膠回收后測(cè)序提示有高級(jí)結(jié)構(gòu)
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對(duì)PCR凝膠電泳使用天根生物試劑盒進(jìn)行膠回收,回收后送去測(cè)序,結(jié)果顯示雙鏈有高級(jí)結(jié)構(gòu),一共測(cè)序4個(gè)樣,3個(gè)樣雙鏈有高級(jí)結(jié)構(gòu),一個(gè)單鏈有高級(jí)結(jié)構(gòu)。之前不做膠回收直接將pcr樣品測(cè)序,從來(lái)沒(méi)有出現(xiàn)過(guò)這個(gè)情況。請(qǐng)問(wèn)是不是膠回收過(guò)程導(dǎo)致這個(gè)結(jié)果,哪個(gè)步驟容易出現(xiàn)dna結(jié)構(gòu)變化 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
新蟲 (小有名氣)
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最近又進(jìn)行了兩次實(shí)驗(yàn),膠回收之后跑電泳條帶很亮位置也正常,送樣測(cè)序后顯示27 F的單鏈全是高級(jí)結(jié)構(gòu),懷疑是不是引物的問(wèn)題,如果引物稀釋沒(méi)有使用新打的去離子水,會(huì)有這么大的影響嗎?另外引物干粉有可能超過(guò)1年了,但是反向引物也是同時(shí)合成的呀,為什么反向的測(cè)序結(jié)果正常呢,焦頭爛額中,還望您不吝賜教,謝謝。另外我們PCR的體系是50微升的,從電泳條帶亮度看這個(gè)量回收得到的產(chǎn)物濃度沒(méi)有問(wèn)題 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
鐵蟲 (小有名氣)
新蟲 (小有名氣)
| 如果你用PCR樣品送到公司測(cè)序,公司會(huì)跑膠分離回收,由于生物公司做膠回收技術(shù)成熟且用的試劑也不差,所以結(jié)果會(huì)比較理想。您自己回收存在高級(jí)結(jié)構(gòu)的問(wèn)題可能是由于您技術(shù)不嫻熟,中間存在引入高級(jí)結(jié)構(gòu)的步驟以及DNA被污染的風(fēng)險(xiǎn),而且國(guó)產(chǎn)的試劑難免效果沒(méi)有進(jìn)口的好。建議您這邊做完膠回收后用1uL的樣品跑個(gè)鑒定膠,確定你回收的樣品大小和濃度合適你在寄到公司去。 |

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