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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 生物科學 » 免疫實驗 » 植物組織免疫組化實驗求助
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Mayprincess新蟲 (初入文壇)
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[求助]
植物組織免疫組化實驗求助 已有1人參與
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請教各位蟲友一些關于免疫組化的問題。我的實驗過程中樣品自發(fā)熒光很強，導致我無法確定目標抗原到底有沒有與抗體結合。 我的材料是花藥，想定位花粉壁上的果膠位置。用的FAA固定的石蠟切片。按照常規(guī)的IHC的方法，脫蠟—復水—微波抗原修復—過氧化氫滅活—牛血清蛋白背景封閉—一抗二抗孵育—抗熒光淬滅劑封片。每個過程都有用PBS洗了，但是在上機觀察發(fā)現(xiàn)空白對照組和處理組都有很強的熒光，而且熒光強度差不多。然后我又用脫完蠟未經(jīng)處理的片子看也有很強的熒光，熒光強度也和前兩個差不多。所以我認為這是自發(fā)熒光，并推測處理組的目標抗原并未與抗體結合，否則其熒光強度應該比另外兩個對照組強。請教各位蟲友，有什么方法可以消除自發(fā)熒光？ @gyesang @hc-material 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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