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fast-rui新蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
異源表達(dá)蛋白遇到問(wèn)題 已有8人參與
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本人最近在做異源表達(dá)，用的pet28a表達(dá)載體，宿主菌是BL21，od搖到0.6-0.8，16℃誘導(dǎo)19h，做了幾次蛋白大部分都在包涵體中，iptg濃度試過(guò)0.1-0.8mM的。這次打算試試培養(yǎng)基多調(diào)幾個(gè)ph試試。 但是想問(wèn)就是我的蛋白等電點(diǎn)是6.74，LB的ph會(huì)影響表達(dá)嗎？破碎的時(shí)候蛋白裂解液的ph設(shè)為多少比較合適？有沒(méi)有大神可以給我點(diǎn)建議，看看能不能把包涵體減少。 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
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fast-rui
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我還想問(wèn)一下，搖到od以后不是要等菌稍微冷卻一點(diǎn)再加iptg嘛，這個(gè)等待的時(shí)間最長(zhǎng)不超過(guò)多久合適呢？因?yàn)槲医裉熳龅膶?duì)照和一個(gè)實(shí)驗(yàn)組已經(jīng)搖到了，對(duì)照等了快一個(gè)小時(shí)了，實(shí)驗(yàn)組有20分鐘了，但是還有三瓶沒(méi)搖起來(lái)，等它們搖起來(lái)我覺(jué)得要好久好久。我是先不管它們直接誘導(dǎo)比較好，讓那三瓶下次做？ 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
14樓2019-06-12 17:39:39
2樓2019-06-11 21:03:08
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3樓2019-06-11 22:22:47
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4樓2019-06-11 22:44:34
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