 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 生物科學 » 蛋白/酶 » 異源表達蛋白遇到問題
| 查看: 4047 | 回復: 18 | ||||
fast-rui新蟲 (小有名氣)
|
[交流]
異源表達蛋白遇到問題 已有8人參與
|
|||
|
本人最近在做異源表達，用的pet28a表達載體，宿主菌是BL21，od搖到0.6-0.8，16℃誘導19h，做了幾次蛋白大部分都在包涵體中，iptg濃度試過0.1-0.8mM的。這次打算試試培養(yǎng)基多調幾個ph試試。 但是想問就是我的蛋白等電點是6.74，LB的ph會影響表達嗎？破碎的時候蛋白裂解液的ph設為多少比較合適？有沒有大神可以給我點建議，看看能不能把包涵體減少。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
回復此樓» 猜你喜歡
招調劑
已經有7人回復
-
0703 東華大學 理學化學均過 a 線，總分 281 求調劑
已經有8人回復
-
材料學碩318求調劑
已經有21人回復
-
271求調劑
已經有5人回復
-
328求調劑
已經有5人回復
-
080500材料科學與工程
已經有11人回復
-
成果系統訪問量大，請15分鐘后再嘗試。由此給您造成的不便，敬請諒解。
已經有17人回復
-
282求調劑
已經有4人回復
-
304求調劑
已經有4人回復
-
化工282求調劑一志愿211
已經有4人回復
2樓2019-06-11 21:03:08
冼亮淀粉酶
專家顧問 (知名作家)
生物大分子降解酶
-
專家經驗: +248 - BioEPI: 73
- 應助: 257 (大學生)
- 貴賓: 0.272
- 金幣: 19428.4
- 散金: 1704
- 紅花: 121
- 帖子: 6582
- 在線: 2775小時
- 蟲號: 856414
- 注冊: 2009-09-25
- 性別: GG
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學
- 管轄: 微生物
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
|
對于在溫度稍高容易形成包涵體的蛋白質，搖到od以后要等菌液冷卻一點再加iptg，因為包涵體的形成有可能形成慣性，一旦開始形成，扭轉需要時間。如果不容易形成包涵體的蛋白質，不必降溫再誘導。 用BL21容易形成包涵體，用大腸桿菌的其它菌株只能是改善，不會根治，因為同一個物種的折疊系統大同小異。換宿主可能要換物種。 加一段融合蛋白質可能改善但不一定根治，而且不能確定會不會對蛋白質的本身性質有改變。具體要什么樣的性質或可以接受什么樣的性質，問你導師。 復性不一定可行，因為不一定能完全復性，而且即使部分復性形成可溶蛋白質，其性質也不一定與正確折疊得到的蛋白質性質一致。具體要什么樣的性質或可以接受什么樣的性質，問你導師。 你把長得快的菌液拿出來放在室溫下短時間不會影響菌體狀態(tài)，最多就是因為接觸氧氣不足造成生長緩慢。要是你擔心，就放在溫度稍低的搖床繼續(xù)搖，大腸桿菌在28度的生長溫度約為37度下八分之一。 要是還有能夠維持更低溫度的搖床，就繼續(xù)降低溫度。大腸桿菌在iptg存在時不會完全停止生長，但在這么低的溫度下就更慢。OD600為1.5時誘導，10度。 很低溫度時，搖床壓力大，或直接走極端，放在4度冰箱時不時拿起來搖一搖。 |
15樓2019-06-14 00:40:45
kindermoon
木蟲 (小有名氣)
- 應助: 6 (幼兒園)
- 金幣: 6875.6
- 紅花: 3
- 帖子: 91
- 在線: 593.4小時
- 蟲號: 831472
- 注冊: 2009-08-20
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物物理化學
16樓2019-06-14 13:40:23
3樓2019-06-11 22:22:47
fast-rui
新蟲 (小有名氣)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 279.8
- 帖子: 78
- 在線: 5.3小時
- 蟲號: 10135223
- 注冊: 2018-09-03
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學
4樓2019-06-11 22:44:34
fast-rui
新蟲 (小有名氣)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 279.8
- 帖子: 78
- 在線: 5.3小時
- 蟲號: 10135223
- 注冊: 2018-09-03
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學
5樓2019-06-11 22:45:04
shuiyuan003
新蟲 (正式寫手)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 6336.7
- 散金: 20
- 紅花: 2
- 帖子: 923
- 在線: 191.7小時
- 蟲號: 2359389
- 注冊: 2013-03-19
- 專業(yè): 保險學
6樓2019-06-12 01:13:04
7樓2019-06-12 08:33:18
張凡云
至尊木蟲 (職業(yè)作家)
- 應助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 13415.5
- 散金: 3094
- 紅花: 13
- 帖子: 4106
- 在線: 1484.9小時
- 蟲號: 2426111
- 注冊: 2013-04-19
- 專業(yè): 生物物理、生物化學與分子
8樓2019-06-12 09:20:44
fast-rui
新蟲 (小有名氣)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 279.8
- 帖子: 78
- 在線: 5.3小時
- 蟲號: 10135223
- 注冊: 2018-09-03
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學
9樓2019-06-12 10:08:00
fast-rui
新蟲 (小有名氣)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 279.8
- 帖子: 78
- 在線: 5.3小時
- 蟲號: 10135223
- 注冊: 2018-09-03
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學
10樓2019-06-12 10:08:49
相關版塊跳轉
我要訂閱樓主 fast-rui 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 化工282求調劑一志愿211 +3 | NA0912 2026-03-05 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 334求調劑 +3 | Trying] 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 江西師范大學王昆-盧章輝課題組招化學方向碩士研究生兩名 +3 | 哈哈大俠 2026-02-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 301求調劑 +4 | 李LJR 2026-03-04 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 283求調劑 +10 | 鹿沫笙 2026-03-02 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工（高分子）290分求調劑 +8 | wengyujian 2026-03-04 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 調劑材料學碩 +6 | 詞凝Y 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[基金申請] 沒有青基直接申請面上，感覺自己瘋了 +6 | kevin63t 2026-03-02 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 求調劑 +7 | 博斯特525 2026-03-04 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 325求調劑 +5 | 學家科 2026-03-04 | 5/250 |
|
|
|
[基金申請] 請問大家，研究風險與應對措施那里， 大家都怎么寫呢 ？ +3 | cauasen 2026-03-02 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 298求調劑 +3 | 人間唯你是清歡 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[碩博家園] 2025屆雙非化工碩士畢業(yè)，申博 +4 | 更多的是 2026-02-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 298求調劑 +10 | 人間唯你是清歡 2026-02-28 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 285求調劑 +9 | 滿頭大汗的學生 2026-02-28 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 化學，材料，環(huán)境類求調劑 +7 | 考研版棒棒 2026-03-02 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料調劑 +3 | 恒順自然 2026-03-02 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 281求調劑 +5 | 2026計算機_誠心 2026-03-01 | 8/400 |
|
|
|
[基金申請] 成果系統訪問量大，請一小時后再嘗試。---NSFC啥時候好哦，已經兩天這樣了 +4 | NSFC2026我來了 2026-02-28 | 4/200 |
|
|
|
[基金申請]
剛錄用，沒有期刊號，但是在線可看的論文可以放為代表作嗎
 10+3
|
arang1 2026-03-01 | 3/150 |
|