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MAS_rice至尊木蟲 (著名寫手)
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構(gòu)建pET29a原核表達載體 已有1人參與
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構(gòu)建pET29a原核表達載體時，只需要構(gòu)建目的基因和6×his的融合蛋白，因此用Nde1和Xho1把S-tag和thrombin site也切掉了，通過同源重組把目的基因重組到pET29a，這時候表達蛋白就多了一個ATG，相當于表達蛋白開始有兩個甲硫氨酸，但是如果構(gòu)載體時把ATG去掉，那么正確的蛋白就只有一個Met，所以，請問是否需要去掉ATG，還是融合蛋白多一個Met沒有關(guān)系呢？ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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wuhu0612331
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2樓2019-06-03 15:35:32
MAS_rice
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3樓2019-06-03 16:16:33
snoopyzxx
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西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵回帖交流 2019-06-06 07:50:23
西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵回帖交流 2019-06-06 07:50:23
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樓主是用的Gibson克隆嗎？如果是，設計引物的時候不要目的基因的第一個密碼子，從第二個密碼子開始擴增。另一個疑問，如果是用Nde I酶切載體，理論上是不存在ATG了啊，因為你是用的重組克隆方式，而不是酶切連接方式。所以需要好好看看你的設計。另，樓主能不能把這個載體送給我？或者跟我換一個？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2019-06-04 22:18:48
MAS_rice
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Infusion 重組，設計引物的時候重新生成了酶切位點，我去掉了片段上的第一個ATG，因此表達蛋白從第一個Met開始的，后面6xhis融合表達正確。其次，大家都說前面多一個Met是沒有關(guān)系的，但是我還是去掉了。質(zhì)粒我們可以交換啊  發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
5樓2019-06-05 01:23:36
snoopyzxx
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6樓2019-06-05 06:09:58
tongbujing 
禁言 (初入文壇)
emuch: 屏蔽內(nèi)容, 違規(guī)存檔, 違規(guī)發(fā)布聯(lián)系方式 2019-06-17 09:51:58
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7樓2019-06-16 16:31:53
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