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【整理總結(jié)】組織培養(yǎng)中的清洗與消毒
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內(nèi)附【細(xì)胞生物學(xué)、細(xì)胞培養(yǎng)、神經(jīng)干細(xì)胞實驗方法】清洗 一、玻璃器皿的清洗： 一般玻璃器皿的清洗包括以下幾個步驟：浸泡、刷洗、浸酸、沖洗四個步驟 浸泡： 一般初次使用和培養(yǎng)用后的玻璃器皿都需要先用清水浸泡，以便軟化和清除附著物，新的玻璃器皿，玻璃面常帶有很多干涸的灰塵，同時在生產(chǎn)過程中，玻璃表面常呈堿性并帶有一些對細(xì)胞有毒的物質(zhì)，如鉛和砷等。新的瓶子使用前應(yīng)先用自來水簡單沖洗，然后用稀鹽酸（5%）浸泡過夜，以中和其中的堿性物質(zhì)。培養(yǎng)后的玻璃皿往往附著有大量的蛋白質(zhì)，干涸后不易刷洗掉，故用后要立即浸入清水中；注意讓水能完全進入瓶皿中，不應(yīng)留有氣泡。（Libertad： 我們實驗室一般直接加入洗滌劑直接浸泡過夜）。 刷洗： 浸泡后的玻璃皿一般仍要用毛刷沾著洗滌劑刷洗，除去較牢固的雜質(zhì)，刷洗的次數(shù)太多，會損害器皿的光澤度，所以要選用軟毛刷和優(yōu)質(zhì)的洗滌劑，不能使用含沙粒的去污粉，刷洗的時候要特別注意瓶角的位置（Libertad：洗滌劑可選用洗潔精或者洗衣粉） 浸酸： 刷洗不掉的極微量雜志經(jīng)過硫酸和重鉻酸鉀清潔液浸泡劑的強氧化作用后，可以被除掉，清潔液對于玻璃器皿無腐蝕作用，去污能力很強，是清洗過程中極為關(guān)鍵的一環(huán)。清潔液由重鉻酸鉀、濃硫酸和蒸餾水按照一定的比例配制而成。浸泡時，器皿應(yīng)該充滿清潔液，勿留有空氣。浸泡時間不應(yīng)低于6小時，一般應(yīng)浸泡過夜。 清洗液可以根據(jù)需要，配制成不同的強度，常用的有以下三種： 【強液】 重鉻酸鉀 63 g 濃硫酸 1000 ml 蒸餾水 200 ml 【次強酸】 重鉻酸鉀 120 g 濃硫酸 200 ml 蒸餾水 1000 ml 【弱酸】 重鉻酸鉀 100 g 濃硫酸 100 ml 蒸餾水 100 ml 注：配制時應(yīng)注意安全，穿戴耐酸手套和圍裙。保護好面部等身體裸露的部分。配制時應(yīng)先使重鉻酸鉀溶于水中（有時可能不會完全溶解），然后緩緩加入濃硫酸，此時產(chǎn)生的熱可以有助于重鉻酸鉀的溶解。配成后的清潔液一般呈棕紅色，經(jīng)長時間使用后，因有機溶劑和水分增多逐漸會變成綠色，表明已經(jīng)失效，要重新配制。舊的清潔液仍有一定的腐蝕作用，用后應(yīng)妥善處理。（Libertad：一般選用配制強酸，廢棄失效的清潔液可深埋土中）。 沖洗： 刷洗浸酸后都必須用水沖洗，使之不留任何殘跡�？捎孟礈煅b置沖洗。如用手工操作的話，每個瓶子都需灌滿水，倒掉，重復(fù)10次以上，最后用蒸餾水漂洗2~3次，烘箱烘干備用。 二、膠塞的清洗 組織培養(yǎng)中用到的膠塞初次使用時帶有大量的滑石粉，應(yīng)先用自來水沖洗，再進行常規(guī)清洗。常規(guī)清洗的方法：每次用后的膠塞要置入水中浸泡，然后用2%NaOH煮沸10~20分鐘，除掉培養(yǎng)中的蛋白質(zhì)。自來水沖洗，然后用1%的稀鹽酸浸泡30分鐘，最后用自來水和蒸餾水沖洗2~3次。（Libertad：常規(guī)清洗的方法這里描述的相對繁瑣，我們一般直接加入洗潔精浸泡后，用毛刷刷洗，然后清水沖凈，最后用三蒸水沖洗3遍，未出現(xiàn)問題）。 三、塑料器皿的沖洗： 一般第一次使用的塑料器皿均已經(jīng)過消毒滅菌密封包裝好的，使用時直接打開包裝使用即可。需要重復(fù)使用的塑料器皿，一般還可使用2~3次，不宜過多，塑料器皿一般不宜使用毛刷刷洗，造成清洗困難。因此刷洗的時候的雜質(zhì)可用脫脂棉拭掉，用流水沖洗干凈，晾干，在用2%的NaOH浸泡過夜，然后用5%的鹽酸浸泡30分鐘，最用用清水和蒸餾水漂洗干凈，晾干備用。（Libertad：前述步驟比較是書上規(guī)范的操作過程，在實踐中，我們發(fā)現(xiàn)如果實驗經(jīng)費有限，要重復(fù)使用的話，可以用軟毛刷加洗潔精謹(jǐn)慎刷洗后，清水沖凈，三蒸水沖洗，最后用滅菌鍋消毒滅菌處理即可使用） 四、包裝 包裝的目的是防止消毒滅菌后再次遭受污染。所以培養(yǎng)用品在消毒滅菌處理前要經(jīng)過嚴(yán)格包裝。清洗后的器皿烘箱中烘干后可用包裝紙、硫酸紙、棉布、鋁飯盒和特制玻璃或金屬制的消毒桶（一般放吸管）包裝起來。有字的紙和棉紙不宜做包裝使用。 【局部包裝】較大的器皿、濾器，消毒筒等只要把瓶口部分用硫酸紙包裹后，再罩以牛皮紙或棉布密封起來用線扎緊。 【全包裝】較小的器皿、注射器、金屬器械和膠塞等，多使用全包裝，現(xiàn)在多采用裝入鋁飯盒的方法。吸管在裝入消毒筒前，應(yīng)該先使用少許的脫脂棉將吸管接口端堵塞，松緊度適宜；過度易脫落，過緊不透氣，影響使用。然后裝入消毒筒中；消毒筒的底部應(yīng)該墊上軟紙或者棉花以防止吸管裝入的時候折斷管尖；最后再包裝入筒中封口。（LIbertd：對于瓶子，可使用錫箔紙包裹瓶口后，用牛皮紙扎緊，放入自制的布袋子包裹。離心管等較小的器皿可放入鋁飯盒中，再用布袋子包裹。200ul、3000ml 1ml的槍頭可在槍頭盒中裝好后，用白紙包裹，再用布袋子包裹。） 消毒： 消毒的方法因物品不同而異。消毒方法分為三類：物理消毒法，包括紫外線、干熱、濕熱（高壓蒸汽）、離心、過濾以及射線等手段；化學(xué)滅菌主要指化學(xué)消毒劑等。 |
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2019-05-27 17:59:18, 69.72 K
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