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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » DNA重組 » overlap PCR
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| 查看: 2315 | 回復: 7 | ||
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Misterboy鐵蟲 (正式寫手)
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[求助]
overlap PCR 已有2人參與
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| 有一個大約10kb的片段，分成兩段，用PCR擴增出來了，且兩片段之間有25BP的同源臂，現(xiàn)在用overlap PCR一直擴不出目的片段，出現(xiàn)了非特異型擴增，primer用的還是原來的，一個片段的上游引物，一個片段的下游引物，延伸時間增加了一倍，但一直做不出來，各位有為有好一點的建議？ |
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西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2019-05-10 17:53:52
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2019-05-10 17:53:52
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建議先不加引物，其他正常加，進行10個循環(huán)，待溫度下降，再加上引物進行30個循環(huán) 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
Misterboy3樓2019-05-09 22:38:57
qingai0128
木蟲 (正式寫手)
- 應助: 56 (初中生)
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- 帖子: 552
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- 蟲號: 814357
- 注冊: 2009-07-23
- 專業(yè): 化學生物學與生物有機化學
2樓2019-05-09 10:19:55
4樓2019-05-09 22:40:27
5樓2019-05-09 22:42:14
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