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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » DNA重組 » overlap PCR
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Misterboy鐵蟲 (正式寫手)
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[求助]
overlap PCR 已有2人參與
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| 有一個大約10kb的片段，分成兩段，用PCR擴增出來了，且兩片段之間有25BP的同源臂，現在用overlap PCR一直擴不出目的片段，出現了非特異型擴增，primer用的還是原來的，一個片段的上游引物，一個片段的下游引物，延伸時間增加了一倍，但一直做不出來，各位有為有好一點的建議？ |
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qingai0128
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2樓2019-05-09 10:19:55
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西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2019-05-10 17:53:52
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建議先不加引物，其他正常加，進行10個循環(huán)，待溫度下降，再加上引物進行30個循環(huán) 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
Misterboy3樓2019-05-09 22:38:57
4樓2019-05-09 22:40:27
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Misterboy
鐵蟲 (正式寫手)
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6樓2019-05-10 08:26:40
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西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵回帖交流 2019-05-30 22:21:08
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10kb很大了，這個延伸應該要很久吧，你可以把overlap搞長一點啊，比如如果總共兩百條編號引物，1-100擴一個，97或者99-200擴一個，這樣overlap不就夠長了嘛，overlap很重要的，重組還是擴增，短了就沒法成功。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
7樓2019-05-30 16:57:28
Misterboy
鐵蟲 (正式寫手)
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8樓2019-05-30 23:42:40
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