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質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
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| 用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染質(zhì)粒入樹突狀細(xì)胞，結(jié)果轉(zhuǎn)染后48小時(shí)，細(xì)胞數(shù)量明顯減少，用臺(tái)盼蘭技術(shù)發(fā)現(xiàn)剩余的細(xì)胞也有近一半死亡，但用RT－PCR仍能擴(kuò)增出目的基因，這是不是說(shuō)明還是有成功轉(zhuǎn)染進(jìn)去的呢！細(xì)胞大量死亡可能是什么原因呢？請(qǐng)各位指教？謝謝！ |
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junjieshao
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2樓2019-04-29 22:25:57
| RT-PCR只能說(shuō)明剩下存活的細(xì)胞中有成功轉(zhuǎn)染進(jìn)去的，不能保證每個(gè)細(xì)胞都轉(zhuǎn)進(jìn)去，還要用G418篩選，設(shè)個(gè)未轉(zhuǎn)染的對(duì)照，一系列G418濃度作用，第10-14天中一種濃度作用的細(xì)胞全部死亡，較此濃度高一級(jí)的濃度作為最佳濃度，作用轉(zhuǎn)染細(xì)胞，對(duì)照組死亡后（一般在8-10天）G418濃度減半，至于轉(zhuǎn)染也是可以使用RFECT的，維持至第14天左右，得到的較少細(xì)胞就是轉(zhuǎn)染成功的。 |
3樓2019-04-30 15:49:06
junjieshao
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4樓2019-05-01 03:52:16
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