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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 動植物 » 實驗技術 » 基因擴增
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玫瑰薔薇月季新蟲 (初入文壇)
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[求助]
基因擴增 已有1人參與
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最近在克隆基因，以cDNA為模板來擴增基因，用普通的TAQ酶能夠擴出來，但是條帶不太亮，用takara的primerstart擴不出來，完全沒有條帶，求助各位大神這種情況應該怎么辦？謝謝！ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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remax520
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【答案】應助回帖
感謝參與，應助指數(shù) +1
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酶的擴增效率和保真性是不同的，Taq酶的保真性差，但是擴增效率還是很好的。有的酶保真性高，因此擴增效率就會低一點，如果對擴增產(chǎn)物沒有太高的保真性能的要求，用Taq酶就可以了 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2019-04-17 20:09:21
3樓2019-07-01 20:43:58
remax520
鐵桿木蟲 (著名寫手)
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【答案】應助回帖
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午飯這個問題，我會從如下幾個方面考慮：1, cDNA是不是存在問題，需要電泳檢測一下，如果是彌散的條帶，說明反轉錄沒有問題。2，引物設計問題，根據(jù)位點序列啟動子和后續(xù)序列反復核對，是否需要互補等操作，某些堿基偏向但是問題不大，只要不行成特殊結構就好。3，利用擴增效率較好的rTaq進行擴增嘗試。4，擴增條件，尤其是退火溫度，可以根據(jù)引物合成時給定的Tm值進行釋當調(diào)整進行擴增嘗試。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2019-07-01 21:00:23
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