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玫瑰薔薇月季新蟲 (初入文壇)
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[求助]
基因擴(kuò)增 已有1人參與
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最近在克隆基因，以cDNA為模板來擴(kuò)增基因，用普通的TAQ酶能夠擴(kuò)出來，但是條帶不太亮，用takara的primerstart擴(kuò)不出來，完全沒有條帶，求助各位大神這種情況應(yīng)該怎么辦？謝謝！ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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remax520
鐵桿木蟲 (著名寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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酶的擴(kuò)增效率和保真性是不同的，Taq酶的保真性差，但是擴(kuò)增效率還是很好的。有的酶保真性高，因此擴(kuò)增效率就會低一點(diǎn)，如果對擴(kuò)增產(chǎn)物沒有太高的保真性能的要求，用Taq酶就可以了 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2019-04-17 20:09:21
3樓2019-07-01 20:43:58
remax520
鐵桿木蟲 (著名寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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午飯這個問題，我會從如下幾個方面考慮：1, cDNA是不是存在問題，需要電泳檢測一下，如果是彌散的條帶，說明反轉(zhuǎn)錄沒有問題。2，引物設(shè)計(jì)問題，根據(jù)位點(diǎn)序列啟動子和后續(xù)序列反復(fù)核對，是否需要互補(bǔ)等操作，某些堿基偏向但是問題不大，只要不行成特殊結(jié)構(gòu)就好。3，利用擴(kuò)增效率較好的rTaq進(jìn)行擴(kuò)增嘗試。4，擴(kuò)增條件，尤其是退火溫度，可以根據(jù)引物合成時給定的Tm值進(jìn)行釋當(dāng)調(diào)整進(jìn)行擴(kuò)增嘗試。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2019-07-01 21:00:23
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