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有關(guān)293 轉(zhuǎn)染問題
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| 各位戰(zhàn)友，我現(xiàn)在做用hek-293做轉(zhuǎn)染，我的質(zhì)粒是氨芐抗性的，我想請教一下是不是所有的細(xì)胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的篩選都可以用G418？ |
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2樓2019-04-11 17:08:53
3樓2019-04-12 17:18:03
你是路人甲
銅蟲 (小有名氣)
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- 專業(yè): 微生物遺傳育種學(xué)
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
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| 最好在轉(zhuǎn)染過程中用無血清培養(yǎng)基，血清會對轉(zhuǎn)染效率有一定的影響。2、轉(zhuǎn)染時細(xì)胞密度最好在60-80%，像我們平時使用的RFect sRNA Transfection Reagent對細(xì)胞幾乎沒有毒性，要求我們的細(xì)胞密度40%就可以了。如果細(xì)胞活性比較好，抗毒性比較好,試劑毒性�。ㄒ话阍趥鞔�18-24h效果比較好），b、細(xì)胞凋亡后能保持一定的細(xì)胞數(shù)（收蛋白，或是RNA，細(xì)胞太少是不行的）。3、轉(zhuǎn)染試劑和siRNA比例問題，這個一般在1-5：1之間，因為細(xì)胞種系等的不同，這個一般要自己摸索的的時候可以降低細(xì)胞融合度，但是要注意a、細(xì)胞出于對數(shù)分裂期的時候轉(zhuǎn)染效率是最好的，嚴(yán)格按照說明書做，馬虎不得，特別是時間的控制也特別重要。 |
4樓2019-06-21 16:53:08
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