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[交流]
有關(guān)293 轉(zhuǎn)染問題
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| 各位戰(zhàn)友,我現(xiàn)在做用hek-293做轉(zhuǎn)染,我的質(zhì)粒是氨芐抗性的,我想請教一下是不是所有的細(xì)胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的篩選都可以用G418? |
金蟲 (正式寫手)
銅蟲 (小有名氣)
| 最好在轉(zhuǎn)染過程中用無血清培養(yǎng)基,血清會對轉(zhuǎn)染效率有一定的影響。2、轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度最好在60-80%,像我們平時(shí)使用的RFect sRNA Transfection Reagent對細(xì)胞幾乎沒有毒性,要求我們的細(xì)胞密度40%就可以了。如果細(xì)胞活性比較好,抗毒性比較好,試劑毒性。ㄒ话阍趥鞔18-24h效果比較好),b、細(xì)胞凋亡后能保持一定的細(xì)胞數(shù)(收蛋白,或是RNA,細(xì)胞太少是不行的)。3、轉(zhuǎn)染試劑和siRNA比例問題,這個(gè)一般在1-5:1之間,因?yàn)榧?xì)胞種系等的不同,這個(gè)一般要自己摸索的的時(shí)候可以降低細(xì)胞融合度,但是要注意a、細(xì)胞出于對數(shù)分裂期的時(shí)候轉(zhuǎn)染效率是最好的,嚴(yán)格按照說明書做,馬虎不得,特別是時(shí)間的控制也特別重要。 |
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