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tq0ax1r新蟲 (初入文壇)
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[求助]
表達(dá)出來的蛋白大小正確有沒有可能不是目的蛋白？ 已有2人參與
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用大腸桿菌在M9 minimum media里用IPTG 誘導(dǎo)表達(dá)，加完IPTG即出現(xiàn)目標(biāo)蛋白，SDSPAGE上大小和我們預(yù)期的一樣。但是它死活不掛鎳柱，N端有6個(gè)histag，試過加6M鹽酸胍、6M尿素，變性條件純化，以及和Ni2+ resin孵育過夜，傳流上柱2次，仍然不掛柱�，F(xiàn)在懷疑該蛋白是不是目的蛋白，打算做western。 但我還是想不通，這個(gè)蛋白大小和目的蛋白一樣，加完IPTG后出現(xiàn)的，隨著誘導(dǎo)時(shí)間的加長而增強(qiáng)，難道會(huì)不是目標(biāo)蛋白？有沒有人曾經(jīng)碰到過這種情況？ |
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2樓2019-03-30 17:29:53
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3樓2019-04-01 14:10:42
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5樓2019-04-05 07:03:23
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6樓2019-04-05 21:09:49
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