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表達出來的蛋白大小正確有沒有可能不是目的蛋白？ 已有2人參與
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用大腸桿菌在M9 minimum media里用IPTG 誘導表達，加完IPTG即出現目標蛋白，SDSPAGE上大小和我們預期的一樣。但是它死活不掛鎳柱，N端有6個histag，試過加6M鹽酸胍、6M尿素，變性條件純化，以及和Ni2+ resin孵育過夜，傳流上柱2次，仍然不掛柱。現在懷疑該蛋白是不是目的蛋白，打算做western。 但我還是想不通，這個蛋白大小和目的蛋白一樣，加完IPTG后出現的，隨著誘導時間的加長而增強，難道會不是目標蛋白？有沒有人曾經碰到過這種情況？ |
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