 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1147 | 回復(fù): 4 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
四葉草B-)新蟲 (初入文壇)
|
[求助]
蛋白破碎，純化問題
|
||
|
1. 200ml大腸桿菌離心棄上清后應(yīng)該加多少緩沖液重懸破碎 2. 破碎功率多少合適呢，之前都是450w，25-30min，破2秒停1秒。最后液體特別清澈，沉淀特別少，是不是破得太過了？ 3. 測破碎上清酶活很高，但是最近純化發(fā)現(xiàn)酶濃度太低，居然只有0.0幾mg/ml，我用AKATA純化的，進樣量1ml，是不是上樣太少呢，最后酶活有，但是與粗酶液比差太多。 4. 之前是100ml菌液加10ml緩沖液重懸破碎，一代準(zhǔn)備200ml加10ml試試，看看粗酶液濃度高會不會使純化后濃度也高點 5. 重懸菌體用的Tris-HCL（PH8.0），純化結(jié)合液用的PBS（PH7.4含少量咪唑），兩個緩沖液不一致會有影響嗎？ 懇請大家?guī)兔χ更c一下！非常感謝！ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有65人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
四葉草B-)
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 17.5
- 帖子: 47
- 在線: 5.5小時
- 蟲號: 9290770
- 注冊: 2018-07-02
- 專業(yè): 生物信息學(xué)
|
可是有酶活，是不是說明有目的蛋白，只是掛上去的太少或者表達得就少？。親，重懸菌體用的緩沖液跟純化用的不一樣會影響純化結(jié)果不？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2019-03-05 10:12:56
|
200ml大概10mlbuffer就夠了～純化后只有零點幾的濃度說明你的蛋白根本就沒有吧，是不是你的蛋白就不掛柱呢？看一下你的序列，rbs后面是否有6個His～超聲的話，我們一般超2s停5s，保證菌體溫度不會過高～ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
2樓2019-03-05 09:32:54
4樓2019-03-05 11:46:59
5樓2019-03-05 11:49:07
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +8 | 倘若起風(fēng)了呢 2026-03-05 | 10/500 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 【0856】化學(xué)工程（085602）313 分，本科學(xué)科評估A類院校化學(xué)工程與工藝，誠求調(diào)劑 +4 | 小劉快快上岸 2026-03-11 | 4/200 |
|
|
|
[文學(xué)芳草園] 伙伴們，祝我生日快樂吧 +5 | myrtle 2026-03-10 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料與化工304求B區(qū)調(diào)劑 +4 | 邱gl 2026-03-11 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿北京化工大學(xué)材料與化工296分求調(diào)劑 +15 | 稻妻小編 2026-03-09 | 17/850 |
|
|
|
[考研] 301求調(diào)劑 +5 | Liyouyumairs 2026-03-11 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料工程330分求調(diào)劑，一志愿985 +5 | 小材化本科 2026-03-07 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 341求調(diào)劑 +3 | 搗蛋豬豬 2026-03-11 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑 +8 | 小木蟲085600 2026-03-09 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 0817學(xué)碩華東區(qū)求調(diào)劑 +3 | 30660438 2026-03-08 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料與化工 一志愿山大 321分 求調(diào)劑 +6 | 每天散步 2026-03-09 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料調(diào)劑 +4 | xxxcm 2026-03-08 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 理學(xué)287分求調(diào)劑 +4 | 看看我. 2026-03-05 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料調(diào)劑 +7 | ounce. 2026-03-05 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 材料科學(xué)（0805）338 求調(diào)劑 +7 | xiaokang3286 2026-03-07 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿211 化學(xué)305分求調(diào)劑 +3 | 0703楊悅305分 2026-03-05 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿哈爾濱工業(yè)大學(xué)0856材料與化工，前三科206，總分283，求調(diào)劑 +7 | 26考研求調(diào)劑 2026-03-06 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料與化工354調(diào)劑 +4 | Lucy-xiao 2026-03-06 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 316求調(diào)劑 +3 | 林小星發(fā)大財 2026-03-05 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 紡織、生物、化學(xué)、材料等專業(yè) +3 | Eember. 2026-03-05 | 7/350 |
|