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western-blot化學(xué)發(fā)光（ECL）的特異性差怎么辦？
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特異性差，出現(xiàn)雜帶或非特異條帶的原因可能有以下幾個方面： 1. 蛋白上樣量過大。可降低蛋白上樣量。 2. 一抗是多克隆抗體，或一抗、二抗?jié)舛忍��？筛鼡Q成單克隆抗體，或降低抗體濃度，縮短抗體孵育時間，優(yōu)化一抗和二抗的使用濃度。 3. 洗膜不充分�？稍黾酉茨ご螖�(shù)和Buffer用量，延長洗膜時間，或在Wash Buffer中添加終濃度0.05%的Tween-20。 4. 目的蛋白在體內(nèi)存在多種修飾形式，如乙�；�，甲基化，磷酸化，糖基化等�？刹殚單墨I(xiàn)，用合適的方法去除蛋白的修飾，或選擇合適的抗體。 5. 目的蛋白降解。重新準(zhǔn)備蛋白樣品，并加入足夠的蛋白酶抑制劑。 6. 發(fā)光液質(zhì)量問題，可選用發(fā)光清晰的ECL發(fā)光液，如Enlight。 |
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