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19920311yrr新蟲 (小有名氣)
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[求助]
求助一氧化氮含量檢測問題 已有1人參與
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一氧化氮含量檢測問題 使用的DAF-FM DA(NO熒光探針),檢測樣品為藻類,問題未作處理的細(xì)胞內(nèi)NO含量變化幅度較大,與實驗組差異不顯著 具體操作:收集細(xì)胞后裝載探針:按照1:1000比例,用試劑盒提供的DAF-FM DA稀釋液稀釋DAF-FM DA,使終濃度為5微摩爾/升。細(xì)胞收集后,用稀釋好的DAF-FM DA重懸細(xì)胞,細(xì)胞濃度為一百萬至二千萬/毫升,37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育30分鐘。上述操作在離心管內(nèi)進(jìn)行。放置在搖床上使藥品混勻,使探針和細(xì)胞充分接觸。用PBS(pH7.4)洗滌細(xì)胞三次,以充分去除未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的DAF-FM DA。用熒光酶標(biāo)儀檢測。使用495nm激發(fā)波長,515nm發(fā)射波長,逐時間點檢測刺激前后熒光的強(qiáng)弱。 |

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