 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 3 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2985 | 回復(fù): 2 | ||
[求助]
qPCR過表達(dá)成功為何western跑不出flag？ 已有1人參與
|
|
已有表達(dá)某白血病融合基因A的測序成功的質(zhì)粒（MSCV-A-flag-IRES-GFP），包病毒后感染正常小鼠骨髓細(xì)胞系，感染后48hGFP陽性率不高在15%左右，分選GFP陽性細(xì)胞到80%左右的陽性率后拿混合克隆進(jìn)行了qPCR和western驗(yàn)證。qPCR用融合基因A的引物能正常擴(kuò)增，且相對表達(dá)量比空載組高3000倍，PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳也能看到明顯過表達(dá)的條帶。由于沒有該融合基因A的直接抗體，因此用flag抗體跑western，過表達(dá)組只有1次能見到非常弱的flag條帶。 然而最想不通的問題在這里—— 上面的混合克隆用流式分選單克隆后養(yǎng)了2周（此時(shí)GFP陽性率接近100%）再做qPCR和western，qPCR過表達(dá)了一萬多倍（顯然比混合克隆高很多），但是western跑了七八次（同樣的flag抗體）就是未見過表達(dá)組有flag條帶。此外，我想要研究的蛋白B，在單克隆組（隨機(jī)取了4組單克隆）和混合克隆組的表達(dá)結(jié)果也接近相反（混合克隆中過表達(dá)融合基因A組顯著高表達(dá)B，而單克隆中過表達(dá)組的B表達(dá)量反而低一些�；�?qū)用婧苊黠@，蛋白層面不太明顯）。 求助大家�。�！ 1）為何基因?qū)用孢^表達(dá)明顯但蛋白層面幾乎看不出過表達(dá)？flag標(biāo)簽蛋白會丟失嗎？ 2）目的基因B在單克隆和混合克隆中的表達(dá)情況不一致，應(yīng)該以哪個(gè)結(jié)果為準(zhǔn)？ 如有想法請告知！新手實(shí)驗(yàn)小白缺乏經(jīng)驗(yàn)，請大家?guī)兔�！謝謝大家。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
274求調(diào)劑0856材料化工
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
材料工程085601調(diào)劑求老師收留
已經(jīng)有10人回復(fù)
-
288求調(diào)劑
已經(jīng)有18人回復(fù)
-
接受26屆調(diào)劑生
已經(jīng)有22人回復(fù)
-
311求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
一志愿北京化工大學(xué)材料與化工296分求調(diào)劑
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
290求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
伙伴們，祝我生日快樂吧
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
深圳大學(xué)碩士招生（2026秋，傳感器方向，僅錄取第一志愿）
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
一志愿河海大學(xué)085900土木水利專碩279求調(diào)劑不挑專業(yè)
已經(jīng)有3人回復(fù)
嵩波魔飄
木蟲 (正式寫手)
嵩波魔飄
- 應(yīng)助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 2235.5
- 散金: 1303
- 紅花: 6
- 帖子: 645
- 在線: 141.4小時(shí)
- 蟲號: 2658576
- 注冊: 2013-09-16
- 性別: GG
- 專業(yè): 免疫生物學(xué)
2樓2020-05-18 07:20:23
最亮xin
木蟲 (職業(yè)作家)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 2097.1
- 散金: 716
- 紅花: 40
- 沙發(fā): 15
- 帖子: 3066
- 在線: 269小時(shí)
- 蟲號: 8378779
- 注冊: 2018-03-26
- 性別: MM
- 專業(yè): 生理生態(tài)學(xué)
蛋白質(zhì)過表達(dá)出來是指沒有條帶嗎？是不是封閉沒做好或者提取蛋白質(zhì)的時(shí)候蛋白質(zhì)已經(jīng)降解了？ 3樓2020-05-18 09:01:37
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 圣靈之心 的主題更新
| 3 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 接受26屆調(diào)劑生 +22 | 豬豬豬毛 2026-03-06 | 22/1100 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[基金申請] 第二個(gè)面上項(xiàng)目的獲批幾率如何？ +5 | wawm9296 2026-03-04 | 7/350 |
|
|
[考研] 279求調(diào)劑 +3 | 莫xiao 2026-03-10 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 327求調(diào)劑 +3 | Ffff03 2026-03-10 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085600 材料與化工 295 求調(diào)劑 +9 | dream…… 2026-03-10 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +4 | 是Lupa啊 2026-03-08 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 337一志愿華南理工材料求調(diào)劑 +5 | mysdl 2026-03-07 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 278求調(diào)劑 +8 | Gale1314 2026-03-06 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 材料與化工，291，求調(diào)劑 +12 | 咕嚕咕嚕123123 2026-03-05 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 研究生招生 +3 | 徐海濤11 2026-03-10 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 家人們 調(diào)劑不迷路 看這里 +8 | likeihood 2026-03-09 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 數(shù)二英二309分請求調(diào)劑 +3 | dtdxzxx 2026-03-09 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)求調(diào)劑 +4 | 很老實(shí)人 2026-03-09 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 337求調(diào)劑 +3 | 睡醒，。 2026-03-09 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 081700學(xué)碩一志愿北京化工大學(xué)數(shù)二英一過六級有競賽求調(diào)劑 +5 | galaxary 2026-03-07 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料科學(xué)（0805）338 求調(diào)劑 +7 | xiaokang3286 2026-03-07 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +4 | 52hz~~ 2026-03-05 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 08工科求調(diào)劑 +3 | 隆LLL 2026-03-06 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 328求調(diào)劑 +6 | vuzhdkfjkx 2026-03-04 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 376求調(diào)劑 +3 | 王浩然sam 2026-03-04 | 3/150 |
|