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Cas9做肺癌細(xì)胞的基因敲除，用體外導(dǎo)入Cas9蛋白的效率如何？
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CRISPR(clustered,regularly interspaced,short palindromic repeats)是一種來自細(xì)菌降解入侵的病毒DNA或其他外源DNA的免疫機(jī)制。在細(xì)菌及古細(xì)菌中，CRISPR系統(tǒng)共分成3類，其中Ⅰ類和Ⅲ類需要多種CRISPR相關(guān)蛋白（Cas蛋白）共同發(fā)揮作用，而Ⅱ類系統(tǒng)只需要一種Cas蛋白即可，這為其能夠廣泛應(yīng)用提供了便利條件。目前，來自Streptococcus pyogenes的CRISPR/Cas9系統(tǒng)應(yīng)用最為廣泛。 Cas9蛋白（含有兩個核酸酶結(jié)構(gòu)域，可以分別切割DNA兩條單鏈。Cas9首先與crRNA及tracrRNA結(jié)合成復(fù)合物，然后通過PAM序列結(jié)合并侵入DNA，形成RNA-DNA復(fù)合結(jié)構(gòu)，進(jìn)而對目的DNA雙鏈進(jìn)行切割，使DNA雙鏈斷裂。 研究人員為了將CRISPR/Cas9技術(shù)發(fā)展為高效的基因打靶工具，又進(jìn)行了優(yōu)化和改造。Cong, L.等人在不影響系統(tǒng)效率的情況下，將crRNA和tracrRNA融合為一條RNA。通過這種簡化，CRISPR/Cas9系統(tǒng)現(xiàn)僅包括兩個元素：Cas9蛋白和sgRNA（single guide RNA）。因此現(xiàn)在人們將CRISPR/Cas9技術(shù)也稱為Cas9/sgRNA技術(shù)。 最近做到了肺癌細(xì)胞某段基因的敲除，前面的師兄師姐都是用的轉(zhuǎn)cas9質(zhì)粒進(jìn)細(xì)胞表達(dá)的方式做的實驗。老師讓我試一下通過體外導(dǎo)入Cas9蛋白的方式來進(jìn)行。有用過這個方法做的嗎？是通過轉(zhuǎn)染試劑直接導(dǎo)入嗎? 然后在丁xx通上找到了一家做cas系列蛋白很全的商家， https://www.biomart.cn/63867/index.htm cas9，dcas9，cas12a，cas13a都有。這幾個蛋白的區(qū)別有人知道嗎？ |
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tongbujing 
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2樓2019-06-16 16:11:08
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