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電轉染實驗效率低的原因有哪些？
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電轉染實驗效率低，可能是以下幾點原因： 1. 不合適的電場強度 合適的電場強度對于電轉染實驗非常重要，電場強度不能過高，過高會增加細胞的死亡率；也不能過低，過低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同細胞系具有不同的最佳場強值，實驗前應測定所轉染細胞系的最佳電場強度。 2. 細胞選擇錯誤 用于電轉的細胞一般選取處于對數(shù)生長期的細胞（15代以內(nèi)，傳代后2d）。因為處于對數(shù)生長期的細胞分裂旺盛，表面結構致密比穩(wěn)定期的細胞差，電轉后，細胞膜的恢復能力強，而且處于有絲分裂期的細胞更容易接受外源DNA. 3. 質(zhì)粒質(zhì)量不佳 應選擇純度高的質(zhì)粒，首先DNA／RNA應該超純(A260／A280>1．8)，其次應不含內(nèi)毒 素，同時質(zhì)粒應溶于雙蒸水而不是TE緩沖溶液。另外，DNA濃度不宜過高。 4. 電轉染試劑不合適 電擊會對細胞造成一定程度的傷害，在轉染試劑的選擇上要注意，應選擇具有細胞膜修復成分的電轉染試劑，如Entranster-E，可將電擊對細胞的損傷降到最低。并且，Entranster-E可適用于lonza、Bio-rad、BTX等多種電轉儀。 |
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