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你是路人甲銅蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
A549細(xì)胞轉(zhuǎn)染 已有1人參與
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| 我最近做A549細(xì)胞轉(zhuǎn)染,轉(zhuǎn)染效率非常低。用的是lipofectamine2000,很多發(fā)表的文章表明用這個(gè)試劑轉(zhuǎn)染A549是可以的,怎么我的不行啊,著急! |
銅蟲(chóng) (小有名氣)
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A549很好轉(zhuǎn)染的,以24孔板為例 day1鋪板,使細(xì)胞密度第二天有60-80% day2換無(wú)血清培養(yǎng)液饑餓2-4h,有條件的話(huà)用OPTI-MEM,每孔400ul 50ul+2ug質(zhì)粒/50ul+2ul lipo2000,分別混勻,靜置3-5min后混在一起,只能輕吹,重了容易吹斷 混合物靜置15-20min后加入到孔板中,此時(shí)孔板中體系為500ul,記錄時(shí)間點(diǎn) 4-6h后換用正常的含血清的培養(yǎng)液,24h-72h之間觀(guān)察轉(zhuǎn)染效率 day3觀(guān)察GFP轉(zhuǎn)染效率還不錯(cuò)喲 |

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