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你是路人甲銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
A549細(xì)胞轉(zhuǎn)染 已有1人參與
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| 我最近做A549細(xì)胞轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染效率非常低。用的是lipofectamine2000，很多發(fā)表的文章表明用這個試劑轉(zhuǎn)染A549是可以的，怎么我的不行啊，著急！ |
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2樓2019-01-21 17:20:25
芳荷戀雨
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 61.6
- 帖子: 73
- 在線: 21.8小時
- 蟲號: 2197292
- 注冊: 2012-12-20
- 性別: MM
- 專業(yè): 腫瘤診斷
【答案】應(yīng)助回帖
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A549很好轉(zhuǎn)染的，以24孔板為例 day1鋪板，使細(xì)胞密度第二天有60-80% day2換無血清培養(yǎng)液饑餓2-4h,有條件的話用OPTI-MEM，每孔400ul 50ul+2ug質(zhì)粒/50ul+2ul lipo2000,分別混勻，靜置3-5min后混在一起，只能輕吹，重了容易吹斷 混合物靜置15-20min后加入到孔板中，此時孔板中體系為500ul,記錄時間點(diǎn) 4-6h后換用正常的含血清的培養(yǎng)液，24h-72h之間觀察轉(zhuǎn)染效率 day3觀察GFP轉(zhuǎn)染效率還不錯喲 |
3樓2019-01-27 13:57:08
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