 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 2 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3027 | 回復(fù): 1 | ||
[求助]
pulldown實驗樣品無法洗脫，陰性對照也呈陽性
|
|
大家好， 最近在做pulldown實驗，用的是talon resin，可是發(fā)現(xiàn)不管是his的蛋白還是沒有his的蛋白都會和樹脂結(jié)合，并且很難洗脫下來（20ul 1m咪唑洗脫，洗下來很少，樹脂上還留有很多，猜測應(yīng)該是非特異性結(jié)合），我直接用樹脂和sdspage buffer煮沸跑膠，結(jié)果不管是實驗組還是陰性對照組都有兩個條帶，這里想問一下什么原因?qū)е碌鞍谉o法洗脫，1，到白粘在樹脂上了，2，每次wash的時候總會有一點buffer和樹脂在一起不能全部去干凈。下面是大致的實驗步驟， 1.準(zhǔn)備好10ul resin用loading buffer 洗3次， 2，上樣，50ug his蛋白與樹脂混合1h， 3.300ul washing buffer 洗3次，13000rpm 2min,每次去除上清，到樹脂與上清和界面處，為了不損失樹脂，剩余還有一些溶液. 4.上樣，50ug unhis tagged蛋白 與樹脂混合30min, 5,同步驟3. 6，剩余15ul buffer，加5ul 4x sds loading buffer 沸水浴3min， 7. sds page， 8.不管是實驗組還是陰性對照都有兩個條帶， |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
推薦一些20種氨基酸檢測的實際應(yīng)用案例
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有97人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
2樓2023-05-13 22:14:46
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 xiaot0036 的主題更新
| 2 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 0856材料與化工，270求調(diào)劑 +13 | YXCT 2026-03-01 | 15/750 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 085600 材料與化工 298 +12 | 小西笑嘻嘻 2026-03-03 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 325求調(diào)劑 +5 | 學(xué)家科 2026-03-04 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料328求調(diào)劑 +6 | 一個蘿卜02 2026-03-03 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿西交大材料學(xué)碩 346 求調(diào)劑 +3 | zju51 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 080500材料科學(xué)與工程 +5 | 202114020319 2026-03-03 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑院校 +6 | 云朵452 2026-03-02 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境工程學(xué)碩288求助調(diào)劑 +7 | 多吃億口芝士 2026-03-02 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0703 總分319求調(diào)劑 +4 | Xinyuu 2026-03-02 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +4 | Afy123456 2026-03-03 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑 +3 | 人間唯你是清歡 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085602化學(xué)工程350，調(diào)劑，有沒有211的 +5 | 利好利好. 2026-03-02 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +7 | BrightLL 2026-03-02 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 化工專碩348，一志愿985求調(diào)劑 +8 | 弗格個 2026-02-28 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 290分材料工程085601求調(diào)劑 數(shù)二英一 +8 | llx0610 2026-03-02 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)，材料，環(huán)境類求調(diào)劑 +7 | 考研版棒棒 2026-03-02 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料與化工328求調(diào)劑 +3 | 。，。，。，。i 2026-03-02 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 熬夜的貓頭鷹 2026-03-02 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料調(diào)劑 +6 | 愛擦汗的可樂冰 2026-02-28 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 322求調(diào)劑 +3 | 熊境喆 2026-03-01 | 3/150 |
|