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[求助]
大腸桿菌原核表達(dá)，菌液直接SDS-PAGE跑不出來?xiàng)l帶，求助 已有2人參與
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最近在做原核表達(dá)，大腸桿菌誘導(dǎo)后做SDS-PAGE，其中菌液直接跑膠上個(gè)月還能做出來，突然有一天跑不出來了，懷疑是自己操作問題。 但是超聲后的上清依然有目的蛋白表達(dá)，請問各位是什么原因？ 我的樣品處理是這樣的： 1 取誘導(dǎo)后菌液，8000g5min離心，棄上清，PBS重懸再8000g5min離心，棄上清； 2 沉淀用25%原體積的裂解buffer重懸后，+蛋白上樣buffer，95℃煮沸5min，12000g離心2min，取上清上樣 |
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NineI
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4樓2022-08-18 14:23:26
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