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ZMQ68新蟲(chóng) (初入文壇)
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最近做EMSA，EB染色后DNA片段一直看不到。想請(qǐng)教有經(jīng)驗(yàn)的前輩一些問(wèn)題�。。。。� 啟動(dòng)子必須加探針標(biāo)記嗎？？？很無(wú)知無(wú)助無(wú)力了。。我現(xiàn)在只用了純化后的啟動(dòng)子片段跟蛋白孵育后跑Native-PAGE，用考馬斯染蛋白有正確條帶，很正常。 但是用EB染色20min紫外照膠卻看不到DNA條帶，不知道什么原因。是不是DNA濃度低，有沒(méi)有做相關(guān)的實(shí)驗(yàn)，能否告知一下您的實(shí)驗(yàn)條件參考一下，，不勝感激�。。。�！ 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
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armigera
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5樓2022-08-05 05:29:10
pennchem
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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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（1） 探針的濃度夠嗎？ （單獨(dú)跑探針染色能染上嗎） （2） 探針的大�。ㄊ欠裉螅瑳](méi)有進(jìn)入分離膠；是否太小，已經(jīng)跑出去了？） （3） 探針與蛋白結(jié)合的條件是否有利于結(jié)合（鎂離子是否必須，鹽離子濃度超過(guò)100mM了嗎？ 緩沖液的pH值是多少？） （4） 在（3）的條件下，探針是否與蛋白結(jié)合（有實(shí)驗(yàn)證據(jù)嗎） （5） 是否有可能存在探針被降解的可能？ （6） 電泳過(guò)程是否大量產(chǎn)熱，是否導(dǎo)致蛋白變性，或者復(fù)合物解離？ （7） 一步步做對(duì)照試驗(yàn)吧，一個(gè)實(shí)驗(yàn)不成功，很難說(shuō)明哪(幾)個(gè)步驟有問(wèn)題 good luck~ |
2樓2022-08-04 17:43:41
jinvijie
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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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我也好奇啟動(dòng)子不標(biāo)記是否可以檢測(cè)出來(lái) 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
3樓2022-08-05 00:24:08
xuxinH
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4樓2022-08-05 00:57:56
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