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Albert冰辰新蟲 (小有名氣)
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[求助]
分光光度法測菌體濃度 已有3人參與
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請問一下,我培養(yǎng)了一瓶細(xì)菌,需要每天測OD值繪制生長曲線。由于我菌液比較少,為了盡量減少測量OD值時取用菌液的損失對實驗的干擾,我選擇了每次少量選取、進行稀釋后再測定的方法。但我今天嘗試了一下,我將菌液用剛配置好的培養(yǎng)基稀釋了十倍,然后以剛配置好的培養(yǎng)基作為參比,但得出來的OD值很小很!有幾個還是負(fù)數(shù)!請問這是什么原因呢?是因為菌液濃度太稀了嗎?另外,這種稀釋后再測OD的方法,是不是應(yīng)該用培養(yǎng)基去稀釋呢?參比應(yīng)該用培養(yǎng)基嗎?另外,用來稀釋的培養(yǎng)基和作為參比的培養(yǎng)基要不要滅菌呢?還有就是我在測定的時候,比色皿并沒有潤洗,請問這樣的誤差大嗎? 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
金蟲 (正式寫手)
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至尊木蟲 (著名寫手)
| 參比是用培養(yǎng)基調(diào)零。不知道你的比色皿是否是小體積的,我們先前的實驗室專門做生長曲線的比色皿是50-100微升的樣品就可以測量。如果你需要的樣品測量的體積大,可以用50 ml的三角瓶來搖菌 (培養(yǎng)20-30ml的菌液)。參比的培養(yǎng)基和稀釋的瓶培養(yǎng)基都要滅菌的。我們以前做的時候做不過是加了甲醛對細(xì)菌進行滅活后再測的,測之前渦旋或者吹打混勻。最好不要稀釋吧,尤其是在剛接種時(lag phase)。 |
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