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基礎(chǔ)科研平臺(tái)新蟲 (小有名氣)
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科研黨必看！體外模擬缺血缺氧，OGD/R造模全步驟整理好啦～
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一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備 - 細(xì)胞：對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，匯合度80%–90% ? - 試劑：無(wú)糖DMEM、PBS、雙抗 ? - 環(huán)境：三氣培養(yǎng)箱/厭氧罐 二、標(biāo)準(zhǔn)操作流程 1.?棄原培養(yǎng)基，預(yù)熱PBS輕洗1–2次 ? 2.?模型組換無(wú)糖DMEM，對(duì)照組換完全培養(yǎng)基 ? 3.?放入缺氧環(huán)境：95%N?+5%CO?，O?<0.5% ? 4.?按細(xì)胞類型孵育： ? - 神經(jīng)元：2–6h ? - 心肌/腎小管：4–8h ? 5.?復(fù)氧復(fù)糖（OGD/R）：換回正常完全培養(yǎng)基，常規(guī)培養(yǎng)6–24h 三、關(guān)鍵避坑要點(diǎn) ? 全程無(wú)菌+37℃預(yù)熱，減少細(xì)胞應(yīng)激 ? 無(wú)糖培養(yǎng)基嚴(yán)格無(wú)葡萄糖 ? 缺氧環(huán)境密封穩(wěn)定，中途不開箱 ? 先做預(yù)實(shí)驗(yàn)摸最佳時(shí)間 四、常用檢測(cè) CCK-8、LDH、流式凋亡、WB、免疫熒光… 照著做，模型穩(wěn)定不翻車? 發(fā)自小木蟲手機(jī)客戶端 |
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