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科研戰(zhàn)神來了新蟲 (小有名氣)
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[交流]
一張圖搞懂qPCR實驗中CT值的定義
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1先看懂qPCR擴增曲線的一生這是 qPCR 擴增的全過程，分 3 個階段：1. 起始期：剛開始循環(huán)，DNA 剛復制，熒光信號弱，和背景噪音差不多，儀器檢測不到明顯變化；2. 指數(shù)期：DNA 片段以 2ⁿ的速度快速復制，熒光信號呈指數(shù)增長，這個階段的擴增效率最穩(wěn)定，是最能反映模板初始量的階段；3. 平臺期：原料耗盡，擴增減速，熒光信號不再增加，曲線趨于平緩。2CT 值CT 值：“熒光達標” 時的循環(huán)數(shù)。上圖中那條灰色的閾值線（Threshold），是儀器設定的可檢測熒光信號閾值。CT 值（Cycle Threshold），就是熒光信號剛好跨過這條門檻時，PCR 已經跑了多少個循環(huán)。綠色曲線：在更早的循環(huán)就達標 → CT 值更�。ㄕf明它的初始量多，只需要跑幾圈就到閾值線） 紅色曲線：需要更多循環(huán)才能達標 → CT 值更大（說明它初始含量低，需要多跑幾圈才能到閾值線）。3CT 越小，初始基因越多qPCR 的定量原理很直接：如果樣品里的目標基因初始含量越高，DNA 復制到 “能被檢測到” 的速度就越快，對應的 CT 值就越�。环粗跏己吭降�，CT 值就越大。比如 過表達（OE）組的 CT 值 < 對照組 → 說明目標基因表達量更高敲低（KD）組的 CT 值 > 對照組 → 說明目標基因表達量更低。 |
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