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畢合生物2024銅蟲 (小有名氣)
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為啥你的細(xì)胞這么矯情？不愿貼壁呢？
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遇到這樣的問題你都如何解決？這次我們就來聊聊，為啥你的細(xì)胞為這么矯情，不愿貼壁呢？ 體外培養(yǎng)細(xì)胞貼壁與什么有關(guān)？ 首先并不是所有的細(xì)胞在體外培養(yǎng)的情況下都會貼壁，但大部分來自實體組織器官的細(xì)胞都會貼壁。 貼壁的過程可能是這樣的：細(xì)胞首先分泌細(xì)胞外基質(zhì)，這種細(xì)胞外基質(zhì)黏附在支持物的表面（培養(yǎng)瓶，培養(yǎng)皿的底面）。然后，細(xì)胞通過其表面表達(dá)的黏附因子與這些細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)合。 所以細(xì)胞貼壁與否和細(xì)胞本身分泌細(xì)胞外基質(zhì)的能力以及細(xì)胞本身表達(dá)的黏附分子的數(shù)量有關(guān)，也與培養(yǎng)皿壁的表面結(jié)構(gòu)有關(guān)。 細(xì)胞為什么要貼壁？ 細(xì)胞貼壁的過程使形態(tài)發(fā)生很大變化，細(xì)胞形態(tài)改變是細(xì)胞內(nèi)骨架（是真核細(xì)胞中的蛋白纖維網(wǎng)架體系，由微管、微絲及中間纖維組成的體系）本身和細(xì)胞外基質(zhì)共同作用的結(jié)果。 密度大于培養(yǎng)基的細(xì)胞（絕大部分細(xì)胞）會沉降在底面上，那么細(xì)胞要生存必定得改善這個環(huán)境，分泌細(xì)胞外基質(zhì)，改善底面的結(jié)構(gòu)，然后很自然就貼附在底面上了。 密度小于水的細(xì)胞，如脂肪細(xì)胞，漂浮在液面上，所以不可能貼在底面上，但是如果將培養(yǎng)液加滿，那么細(xì)胞能夠與培養(yǎng)瓶上面的壁接觸同樣可以貼壁。因此可以說，細(xì)胞貼壁是適應(yīng)環(huán)境的一種反應(yīng)。 細(xì)胞不貼壁，可能是這些原因？ 細(xì)胞的傳代最重要的是胰酶處理時間：消化不夠細(xì)胞本身就是成團(tuán)的；若胰酶處理太久，容易造成細(xì)胞膜蛋白損傷，使細(xì)胞貼壁不緊，顯微鏡下觀察立體感不強(qiáng)，嚴(yán)重的時候甚至?xí)斐杉?xì)胞死亡。 缺少貼壁因子：血清中含有促貼壁因子，而無血清培養(yǎng)基工藝中由于缺少這種促貼壁因子，細(xì)胞的貼壁效果會下降很多。 支原體或細(xì)菌的污染。 培養(yǎng)液配置、儲存不當(dāng)，如 pH 值過堿，Gln 量太少等原因。 復(fù)蘇的細(xì)胞本身狀態(tài)不好，已經(jīng)老化，失去貼附性。 接種細(xì)胞數(shù)目太少，無法分泌足夠的細(xì)胞外基質(zhì)。 復(fù)蘇時處理速度太慢，復(fù)蘇過程不當(dāng)。 如何促進(jìn)貼壁效果？ 1. 最好用塑料瓶培養(yǎng)，如果是玻璃瓶, 那么可以用鼠尾膠原包被一下培養(yǎng)瓶，或者用鹽酸對培養(yǎng)瓶進(jìn)行蝕刻，或者涂 Laminin/fibronectin/collagen/BSA，也可以幫助細(xì)胞貼附新的培養(yǎng)瓶，細(xì)胞不易貼壁，建議加多聚賴氨酸處理。 2. 正確配制消化液或培養(yǎng)液。 3. 使用合適的細(xì)胞外基質(zhì)或貼壁試劑。 4. 復(fù)蘇新的細(xì)胞，第一周用 20% 血清幫助細(xì)胞復(fù)原。 5. 傳代接種一定要鋪的均勻，避免細(xì)胞抱團(tuán)生長。 6. 細(xì)胞傳代 24 小時之內(nèi)，最好不要晃動，以免影響貼壁。 7. 體內(nèi)上皮細(xì)胞生長在膠原構(gòu)成的基膜上，因此培養(yǎng)在有膠原的底物上有利于生長。人或小鼠表皮細(xì)胞培養(yǎng)，可以用γ射線照射后的 3T3 細(xì)胞為飼養(yǎng)層，另外降低 pH、Ca2 +含量和溫度，均有利于上皮細(xì)胞生長。 畢合生物(www.bihebio.com)提供服務(wù)內(nèi)容：分子生物學(xué)、免疫, 重組蛋白及ELISA相關(guān)、活性小分子化合物、高端化學(xué)、材料化學(xué)、細(xì)胞資源庫與培養(yǎng)相關(guān)、生命科學(xué)、天然產(chǎn)物 |
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