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科研戰(zhàn)神來了新蟲 (小有名氣)
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WB實(shí)驗(yàn)必看：一抗來源如何決定二抗種屬？
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WB 實(shí)驗(yàn)中，一抗種類繁多（針對不同目的蛋白），但二抗常用的僅抗兔、抗鼠兩種，核心遵循 “一抗來源決定二抗種屬” 的選擇原則，原因如下： 一、抗體結(jié)構(gòu)基礎(chǔ) 抗體呈 “Y” 字形，分為兩部分： 1. 可變區(qū)（Fab 段）：“Y” 的頂端，負(fù)責(zé)特異性結(jié)合目的蛋白，不同抗體的 Fab 段不同，決定了抗體識別蛋白的專一性； 2. 恒定區(qū)（Fc 段）：“Y” 的主干，序列由物種決定，同一物種（如兔、鼠）所有 IgG 抗體的 Fc 段幾乎完全一致，是區(qū)分抗體來源種屬的 “身份標(biāo)識”，不同物種的 Fc 段差異顯著。 二、二抗的作用 二抗不直接結(jié)合目的蛋白，核心功能是 “信號放大”：它特異性結(jié)合一抗的 Fc 段，同時(shí)攜帶 HRP、AP 等顯影標(biāo)簽，通過標(biāo)簽催化化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，讓一抗（及結(jié)合的目的蛋白）形成可見條帶，是 WB 顯影的關(guān)鍵橋梁。 三、“一抗來源決定二抗種屬” 的原理 1. 二抗是定向制備的：抗兔二抗由兔免疫球蛋白（含兔源抗體 Fc 段）免疫其他動物（如山羊）制成，專門識別兔源一抗的 Fc 段；抗鼠二抗同理，由鼠免疫球蛋白免疫制備，僅識別鼠源一抗的 Fc 段； 2. 結(jié)合具有特異性：二抗經(jīng)過篩選，僅能識別對應(yīng)物種一抗的 Fc 段，無法跨物種結(jié)合（如抗兔二抗不能識別鼠源一抗的 Fc 段）。 |
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