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科研戰(zhàn)神來(lái)了新蟲(chóng) (小有名氣)
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細(xì)胞培養(yǎng)血清怎么選擇？胎牛血清/新生牛血清/小牛血清的區(qū)別與選擇指南
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| 在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，我們經(jīng)常聽(tīng)到胎牛血清，小牛血清，新生牛血清等，它們有什么區(qū)別，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中如何選擇呢？1血清的作用①提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：血清中含有氨基酸、維生素、礦物質(zhì)等基礎(chǔ)營(yíng)養(yǎng)，以及 IGF、EGF 等生長(zhǎng)因子，是細(xì)胞增殖必不可少的成分②對(duì)于貼壁細(xì)胞而言，血清中含纖維連接蛋白、層粘連蛋白等，能夠幫助貼壁細(xì)胞附著生長(zhǎng)。③含有白蛋白等成分，能夠維持培養(yǎng)基滲透壓和 pH 穩(wěn)定，保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷。2不同血清的區(qū)別與選擇胎牛血清、小牛血清和新生牛血清之間的核心區(qū)別在于采血來(lái)源的牛齡、成分組成以及采血方式①胎牛血清：采血對(duì)象是未出生的胎牛，通過(guò)無(wú)菌心臟穿刺采集，胎牛從未接觸外界環(huán)境，未進(jìn)食過(guò)母乳或飼料。牛齡通常在妊娠 3~8 個(gè)月，它的抗體、補(bǔ)體等有害成分最少，生長(zhǎng)因子含量最豐富，適合干細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求高的細(xì)胞。②新生牛血清：來(lái)自出生 10 日內(nèi)未哺乳的小牛，成分穩(wěn)定性中等，適合普通腫瘤細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等常規(guī)培養(yǎng)。③小牛血清：采血對(duì)象是出生后數(shù)周至 6 個(gè)月的小牛，已經(jīng)采食母乳和飼料，消化系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)已初步發(fā)育。抗體補(bǔ)體含量較高，營(yíng)養(yǎng)成分相對(duì)單一，適合對(duì)血清要求不高的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)。血清的選擇原則：實(shí)驗(yàn)要求越高，越優(yōu)先選胎牛血清；常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)可根據(jù)預(yù)算選新生牛血清及小牛血清。3相關(guān)小問(wèn)題①細(xì)胞培養(yǎng)的時(shí)候，血清含量越高越好嗎？細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)血清含量并不是越高越好的，需要根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型和實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪M(jìn)行調(diào)整：常規(guī)傳代細(xì)胞如HEK293、Hela一般添加 10% 血清即可，原代或干細(xì)胞等難培養(yǎng)的細(xì)胞可提升至 15%~20%，過(guò)高濃度血清不僅會(huì)增加成本、還可能因抑制因子累積、誘導(dǎo)細(xì)胞分化或表型改變，以及降低營(yíng)養(yǎng)氣體交換效率，最終抑制細(xì)胞增殖甚至引發(fā)老化。②血清在使用之前需要滅活嗎？血清的滅活一般是（56℃水浴 30 分鐘），其主要的作用是破壞血清中的補(bǔ)體系統(tǒng)（補(bǔ)體是血清中一組具有細(xì)胞毒性的蛋白復(fù)合物，如果沒(méi)有滅活，補(bǔ)體可能與細(xì)胞表面的抗體結(jié)合，引發(fā)補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞裂解，導(dǎo)致細(xì)胞死亡或生長(zhǎng)狀態(tài)變差。），但是滅活的同時(shí)會(huì)導(dǎo)致部分生長(zhǎng)因子流失、沉淀增多，對(duì)多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)沒(méi)有明顯優(yōu)勢(shì)。血清不是必須滅活才能使用，是否需要滅活取決于細(xì)胞類(lèi)型和實(shí)驗(yàn)?zāi)康�，常�?guī)細(xì)胞培養(yǎng)無(wú)需滅活；如果是免疫相關(guān)細(xì)胞、敏感細(xì)胞，可嘗試滅活（56℃水浴 30 分鐘），并對(duì)比滅活前后的細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。③血清不能反復(fù)凍融血清不能反復(fù)凍融，反復(fù)低溫 - 室溫循環(huán)會(huì)導(dǎo)致血清中的蛋白（如白蛋白、生長(zhǎng)因子）變性、沉淀，破壞補(bǔ)體系統(tǒng)和營(yíng)養(yǎng)成分，最終降低血清活性。因此當(dāng)我們收到血清后，應(yīng)該立即分裝到50mL離心管中，注意50mL離心管不能裝滿(mǎn)50mL血清，裝入40mL即可。 |
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