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| 【懸賞金幣】回答本帖問(wèn)題，作者愛(ài)吃旺旺碎冰冰將贈(zèng)送您 5 個(gè)金幣 | ||
愛(ài)吃旺旺碎冰冰新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
pMg36e怎么這么難做啊
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 請(qǐng)教各位大佬：我的質(zhì)粒是pMg36e，目的基因1500bp左右，酶切位點(diǎn)是SacI和PstI，雙酶切最開(kāi)始連接不上，后來(lái)用的套擴(kuò)目的片段，同源重組連接的，轉(zhuǎn)化涂平板挑單克隆，菌液PCR有條帶,質(zhì)粒跑電泳有條帶但也有點(diǎn)雜帶，質(zhì)粒PCR有條帶，雙酶切驗(yàn)證有條帶，委托公司設(shè)計(jì)引物質(zhì)粒送測(cè)顯示沒(méi)有連接在預(yù)期的位置上，又用對(duì)質(zhì)粒測(cè)序的引物進(jìn)行高保真擴(kuò)增有明顯的雜帶一個(gè)是目的條帶一個(gè)是空載條帶，膠回收目的片段送測(cè)測(cè)兩次都顯示無(wú)信號(hào)。。。真沒(méi)招了，做大半年了馬上畢業(yè)了，還沒(méi)做出來(lái)。。。救救孩子吧。 |
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