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畢合生物2024銅蟲(chóng) (小有名氣)
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微生物檢測(cè)中常見(jiàn)問(wèn)題及解答
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標(biāo)準(zhǔn)操作步驟（以四區(qū)劃線法為例） 準(zhǔn)備工作： 無(wú)菌環(huán)境： 在超凈工作臺(tái)或酒精燈火焰旁的無(wú)菌區(qū)域操作。 標(biāo)記： 在平板底部（有培養(yǎng)基的一面）標(biāo)記菌株名稱、日期。 預(yù)熱： 點(diǎn)燃酒精燈，將接種環(huán)的金屬絲部分在火焰外焰中灼燒至紅熱，并灼燒整個(gè)金屬絲長(zhǎng)度，滅菌。 冷卻： 將紅熱的接種環(huán)在平板邊緣的空白培養(yǎng)基表面或空氣中冷卻數(shù)秒（至關(guān)重要！避免燙死待接種的菌種）。 取菌： 用無(wú)菌手法打開(kāi)含菌種的試管或平板，用冷卻的接種環(huán)輕觸單個(gè)菌落或菌苔，沾取少量菌體（肉眼剛能看見(jiàn)痕跡即可，寧少勿多）。 劃線操作（四區(qū)法）： 第一區(qū)（A區(qū)）： 將沾有菌種的接種環(huán)，在平板培養(yǎng)基表面約1/4的區(qū)域（A區(qū)）內(nèi)，輕輕地、緊密地劃出3-5條平行線或連續(xù)之字形線。劃線時(shí)接種環(huán)與平板表面成 30-45度角，力度要輕，不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)基。 此區(qū)域菌量最多，線條密集。 第二區(qū)（B區(qū)）： 將接種環(huán)在火焰上再次灼燒、冷卻。 將接種環(huán)僅接觸第一區(qū)線條的末端1-2次，然后在緊鄰的1/4區(qū)域（B區(qū)）劃出新的線條。新線條應(yīng)與第一區(qū)的末端有少量重疊，然后向空白區(qū)延伸。 劃4-6條線，覆蓋B區(qū)。此區(qū)域菌量被稀釋。 第三區(qū)（C區(qū)）與第四區(qū)（D區(qū)）： 重復(fù)“灼燒-冷卻-接觸前一區(qū)末端-劃線”的步驟。 每一新區(qū)都只接觸前一區(qū)的末端，進(jìn)行進(jìn)一步稀釋。 到第四區(qū)（D區(qū)）時(shí)，接種環(huán)上的菌量已非常少，最有可能劃出分散的單菌落。 完成： 劃線完成后，蓋上皿蓋。將接種環(huán)徹底灼燒滅菌后放下。 將平板倒置（皿蓋在下，皿底在上），放入恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。倒置可防止冷凝水滴落沖散菌落。 劃出“美觀”單菌落的關(guān)鍵技巧 取菌量是關(guān)鍵！ “看不見(jiàn)的取菌量”是最好的起點(diǎn)。如果第一區(qū)線條就很濃密，后面很難分開(kāi)。 充分冷卻接種環(huán)！ 熱環(huán)會(huì)殺死細(xì)菌，導(dǎo)致劃線失敗。 力度要輕柔： 輕輕撫表面。劃破瓊脂會(huì)影響菌落形態(tài)，也容易交叉污染。 線條流暢且密集： 第一、二區(qū)的線條應(yīng)緊密，才能有效“掛”住菌體。后兩區(qū)可以稍稀疏。 分區(qū)清晰，不回頭： 劃新區(qū)時(shí)，線條絕對(duì)不能回頭接觸到高濃度區(qū)。一旦接觸，稀釋作用就破壞了。 “字”不要寫(xiě)太大： 每區(qū)的劃線范圍不要超過(guò)平板的1/4，為后續(xù)區(qū)域留出足夠空間。 使用合適的工具： 新手可以使用一次性塑料接種環(huán)，硬度適中，不易劃破平板。熟練后可使用金屬環(huán)。 練習(xí)手腕動(dòng)作： 以手腕為軸心，平穩(wěn)移動(dòng)手臂，而不是僵硬地移動(dòng)整個(gè)胳膊。 常見(jiàn)問(wèn)題與解決方案 問(wèn)題現(xiàn)象 可能原因 解決方案 整個(gè)平板長(zhǎng)成一片菌苔 1. 取菌量過(guò)多2. 接種環(huán)未冷卻3. 分區(qū)未灼燒/稀釋 減少取菌量，確保冷卻，嚴(yán)格執(zhí)行灼燒和分區(qū)操作 只有第一區(qū)長(zhǎng)菌，后面無(wú)菌 1. 接種環(huán)灼燒后未接觸前一區(qū)末端2. 劃線時(shí)懸空，未接觸平板 確保新區(qū)線條的起始端與前區(qū)末端有重疊 菌落全在劃線上，線間無(wú)菌 劃線力度過(guò)輕或接種環(huán)未接觸培養(yǎng)基 調(diào)整角度和力度，確保接種環(huán)輕輕接觸培養(yǎng)基表面 菌落分布不均勻，不美觀 劃線不流暢、手抖、回頭 多加練習(xí)，保持動(dòng)作平穩(wěn)，規(guī)劃好劃線路徑 劃破了培養(yǎng)基 用力過(guò)猛，或接種環(huán)有毛刺 動(dòng)作輕柔，檢查并更換接種環(huán) “美觀”的標(biāo)準(zhǔn) 單菌落分離度好： 在第三、四區(qū)有大量彼此分離的獨(dú)立菌落。 菌落形態(tài)典型： 菌落大小均勻，邊緣整齊，能清晰展示該菌種的固有形態(tài)（圓形、光滑等）。 劃線區(qū)域整潔： 線條流暢，分區(qū)明顯，無(wú)雜菌污染，平板無(wú)劃痕。 整體觀感： 看起來(lái)清晰、專業(yè)，像一件“作品”。 最后，多加練習(xí)！ 這是最有效的途徑�？梢杂门f平板（無(wú)培養(yǎng)基）或直接在紙上練習(xí)手腕動(dòng)作和力度控制，熟練后再用真實(shí)菌種操作。 畢合生物(www.bihebio.com)提供服務(wù)內(nèi)容：分子生物學(xué)、免疫, 重組蛋白及ELISA相關(guān)、活性小分子化合物、高端化學(xué)、材料化學(xué)、細(xì)胞資源庫(kù)與培養(yǎng)相關(guān)、生命科學(xué)、天然產(chǎn)物 |
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