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科研戰(zhàn)神來了新蟲 (小有名氣)
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根據(jù)細(xì)胞密度，判斷適合做什么實(shí)驗(yàn)❓
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不同的細(xì)胞密度，適合做的實(shí)驗(yàn)都不一樣 🌟貼壁細(xì)胞90～100%密度： 基本做不了什么實(shí)驗(yàn)，只適合傳代or凍存，或者細(xì)胞轉(zhuǎn)染后長滿了然后收細(xì)胞檢測 🌟貼壁細(xì)胞70～80%密度： 細(xì)胞處于快速生長期💨，此時適合做轉(zhuǎn)染，或者提蛋白、RNA，也適合加藥處理等等… 貼壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染密度過大會導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率下降，密度過小會影響細(xì)胞狀態(tài)，70～80%剛剛好 🌟貼壁細(xì)胞30～40%密度： 適合做慢病毒感染，不適合做轉(zhuǎn)染或加藥等實(shí)驗(yàn)，病毒感染最好用低密度，感染完畢直接換液等細(xì)胞生長即可，后續(xù)可篩選或檢測感染效果 🔝貼壁細(xì)胞如何提高轉(zhuǎn)染效率？ 1、細(xì)胞在70～80%轉(zhuǎn)染 2、選擇狀態(tài)很好的細(xì)胞，蛋白表達(dá)會更好，且轉(zhuǎn)染至少36h。 3、轉(zhuǎn)染前可饑餓處理幾小時，但是這樣有細(xì)胞狀態(tài)變差的風(fēng)險，只適用于部分蛋白的轉(zhuǎn)染。 懸浮細(xì)胞做實(shí)驗(yàn)通用密度：100萬/ml 🌟懸浮細(xì)胞30～40%密度 同樣適合慢病毒感染，懸浮細(xì)胞感染難度比貼壁大很多，且細(xì)胞沒貼壁那么耐糙，因此感染時可以先測一個MOI和滴度再做❗️具體測定方法之前發(fā)過哦～ 🌟懸浮細(xì)胞90～100%密度 同樣適合凍存、傳代細(xì)胞，或動物實(shí)驗(yàn) ✅懸浮細(xì)胞盡可能保證其密度足夠的生長，不要頻繁傳代，可能影響細(xì)胞狀態(tài)，因?yàn)橛幸徊糠謶腋〖?xì)胞，稀疏長得很差，密度大反而越長越好，這是和貼壁不太一樣的地方。 ✅細(xì)胞狀態(tài)佳的話，可直接傳代不用離心，除非培養(yǎng)基黃了再離心換液，直接把一皿的細(xì)胞1分為2，然后往2個皿中補(bǔ)新的培養(yǎng)基即可 |
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