 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 439 | 回復(fù): 0 | |||
1073268128新蟲 (小有名氣)
|
[交流]
長肽合成（>50aa）的詳細(xì)方案、疑難解答和案例分享。
|
|
以“天然化學(xué)連接”為核心的三步法 目前最主流和可靠的方法是 “天然化學(xué)連接” 及其衍生技術(shù)。 第一步：戰(zhàn)略規(guī)劃與片段設(shè)計 這是成功最關(guān)鍵的一步，決定了后續(xù)所有工作的難易。 1. 分割位點選擇： · 首選Cys連接：NCL反應(yīng)要求一個片段C端為硫酯，另一個片段N端為半胱氨酸。因此，最優(yōu)策略是在目標(biāo)序列的天然半胱氨酸位點進(jìn)行分割。 · “偽”半胱氨酸策略：若無天然Cys，可通過定點突變，引入一個不影響活性的Cys（如將Ser或Ala突變?yōu)镃ys）。 · 多種連接化學(xué)：如果無法引入Cys，可以使用其他連接化學(xué)，如絲氨酸/蘇氨酸連接、KAHA連接等，但NCL因其高效和特異性仍是首選。 2. 片段長度設(shè)計： · 每個片段長度建議在15-25個氨基酸之間。太短會增加連接步驟；太長則合成和純化難度指數(shù)級增加。 · 確保每個片段本身合成難度可控，避免在片段內(nèi)部就包含困難序列。 3. 保護(hù)基策略： · 片段合成階段：使用標(biāo)準(zhǔn)的 Fmoc-SPPS。 · 對于連接位點的氨基酸，側(cè)鏈保護(hù)基必須與連接化學(xué)兼容。例如，在NCL中，半胱氨酸的側(cè)鏈硫醇通常使用對酸穩(wěn)定的Acm保護(hù)基，或在連接時臨時保護(hù)。 第二步：片段的合成、切割與純化 1. 片段合成： · 采用優(yōu)化過的Fmoc-SPPS方案，尤其針對可能存在的困難序列（使用我們之前討論過的 HATU/HOAt, Oxyma/DIC, 假脯氨酸, 骨架酰胺保護(hù)基 等策略）。 · 使用低負(fù)載樹脂以減少鏈間聚集。 · 對于C端為硫酯的片段，需要使用專門的硫酯生成樹脂。 2. 片段純化與鑒定： · 這是絕對不能省略的步驟。必須將每個合成出的粗片段通過制備型HPLC進(jìn)行高純度純化（>95%）。 · 使用分析型HPLC和質(zhì)譜對每個純化后的片段進(jìn)行嚴(yán)格鑒定，確保其序列正確、純度達(dá)標(biāo)�！袄M(jìn)，垃圾出” 在這里體現(xiàn)得淋漓盡致。 第三步：片段的溶液相連接 1. 連接反應(yīng)： · 將兩個純化的片段在變性條件下（如高濃度胍鹽或尿素）混合，以保持片段溶解度。 · 加入硫醇催化劑（如巰基苯并噻唑），在pH 6.5-7.5的緩沖液中反應(yīng)。 · 反應(yīng)通常在幾小時到幾十小時內(nèi)完成，通過HPLC監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程。 2. 后處理與最終純化： · 連接反應(yīng)完成后，對產(chǎn)物進(jìn)行脫鹽或沉淀。 · 通過制備型HPLC純化最終的全長多肽。 · 使用質(zhì)譜、分析型HPLC等進(jìn)行最終鑒定。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
歡迎211本科同學(xué)，過A區(qū)國家線，A區(qū)非偏遠(yuǎn)一本，交叉學(xué)科課題組
已經(jīng)有12人回復(fù)
-
成果系統(tǒng)訪問量大，請15分鐘后再嘗試。由此給您造成的不便，敬請諒解。
已經(jīng)有14人回復(fù)
-
281電子信息求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
材料277分求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
求調(diào)劑院校
已經(jīng)有12人回復(fù)
-
293求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
化學(xué) 0703求調(diào)劑 總分293 一志愿211
已經(jīng)有10人回復(fù)
-
320材料一志愿西工大專碩英二數(shù)二 有兩年光伏工作經(jīng)驗
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
材料328求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
304分材料專碩求調(diào)劑
已經(jīng)有12人回復(fù)
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 1073268128 的主題更新
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 281電子信息求調(diào)劑 +4 | jhtfeybgj 2026-03-02 | 8/400 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 0856材料求調(diào)劑 +15 | hyf hyf hyf 2026-02-28 | 16/800 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)工程求調(diào)劑 +10 | 化工人999 2026-03-04 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 320材料與化工，求調(diào)劑 +6 | 鶴遨予卿 2026-03-04 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿西交化工專碩288專業(yè)課93求調(diào)劑 +5 | 好運(yùn)好運(yùn)接接 2026-03-04 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 322分 085600求調(diào)劑，有互聯(lián)網(wǎng)+國金及主持省級大創(chuàng)經(jīng)歷 +6 | 熊境喆 2026-03-04 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 331求調(diào)劑 +3 | zzZ&zZ 2026-03-03 | 3/150 |
|
|
|
[論文投稿]
EST拒稿重投
 5+3
|
15102603076 2026-03-02 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 復(fù)試調(diào)劑 +4 | 杰尼龜aaa 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 290求調(diào)劑 +9 | ErMiao1020 2026-03-02 | 9/450 |
|
|
|
[碩博家園] 2025屆雙非化工碩士畢業(yè)，申博 +4 | 更多的是 2026-02-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 268求調(diào)劑 +10 | 簡單點0 2026-03-02 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 278求調(diào)劑 +3 | 滿天星11_22 2026-03-02 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +5 | kkcoco25 2026-03-02 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 材料類考研調(diào)劑 +6 | gemmgemm 2026-03-01 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑 +10 | 人間唯你是清歡 2026-02-28 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 261求調(diào)劑 +3 | 陸lh 2026-03-01 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +3 | Y墨明棋妙Y 2026-02-28 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +6 | 曼殊2266 2026-02-28 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +4 | 73372112 2026-02-28 | 6/300 |
|