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科研戰(zhàn)神來了新蟲 (小有名氣)
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【模型攻略】揭秘多發(fā)性硬化的幕后推手！
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導語：你是否聽說過“多發(fā)性硬化（Multiple sclerosis ，MS）”？這是一種被稱為“不死癌癥”的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，患者可能是突然視物模糊的年輕人，或是莫名行走困難的壯年。全球有數(shù)百萬患者正與之抗爭，但病因至今成謎�？茖W家們?nèi)绾窝芯窟@種復雜的疾��？答案可能藏在一只小小的實驗鼠身上。在所有為復制MS而開發(fā)的模型中，實驗性自身免疫性腦脊髓炎 (EAE) 最能反映MS的自身免疫發(fā)病機制。通過一種名為EAE的模型，他們得以在實驗室里“復現(xiàn)”這場疾病，并尋找攻克它的鑰匙。今天，就讓我們走進這場精彩的科學偵探故事。 實驗性自身免疫性腦脊髓炎（Experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE）作為多發(fā)性硬化（MS）的動物模型，其構(gòu)建過程中實驗動物的選擇至關(guān)重要。不同的物種、品系、年齡和性別都會影響模型的成功率和實驗結(jié)果的可重復性。以下從多個方面詳細分析EAE模型的構(gòu)建。PART 01物種/品系/試劑選擇 物種選擇EAE模型最常用的實驗動物是嚙齒類動物，尤其是大、小鼠。這類動物因其成本低、繁殖快、易于操作且免疫系統(tǒng)與人類有一定相似性，成為EAE研究的主流選擇。此外，嚙齒類動物的EAE模型能夠較好地模擬MS的自身免疫病理特征，為研究MS的發(fā)病機制和藥物篩選提供了重要平臺。品系選擇不同品系的動物對EAE的易感性存在顯著差異。✔ C57BL/6小鼠：常用的EAE模型動物，因其對髓鞘少突膠質(zhì)細胞糖蛋白（MOG35-55）誘導的EAE具有高度敏感性。✔ Lewis大鼠：常用的模型動物，尤其適用于研究維生素等營養(yǎng)物質(zhì)對EAE的影響。✔ Wistar大鼠：因其穩(wěn)定的免疫反應(yīng)和易于操作的特點，常用于T細胞疫苗的研究。年齡和性別✔ 年齡：年輕動物（通常為6-8周齡）因其免疫系統(tǒng)較為活躍，更易誘導EAE模型。✔ 性別：性別差異在EAE模型中也有顯著影響。例如，雌性動物在某些研究中表現(xiàn)出更高的發(fā)病率和更嚴重的癥狀，這可能與激素水平和免疫反應(yīng)的性別差異有關(guān)。試劑選擇✔ 抗原選擇：常用的抗原包括髓鞘少突膠質(zhì)細胞糖蛋白多肽（MOG35-55）、髓鞘蛋白脂質(zhì)蛋白多肽（PLP）和髓鞘堿性蛋白（MBP）。其中，MOG35-55是C57BL/6J小鼠誘導EAE的常用抗原。✔ 佐劑：完全福氏佐劑（CFA）是EAE誘導中的常用佐劑，用于增強免疫反應(yīng)。✔ 百日咳毒素（PTx）：用于增強EAE的誘導效果，但其劑量和批次效價需嚴格控制，以確保模型的一致性。 PART 02免疫操作 01抗原乳化將抗原（如MOG35-55）與CFA按比例混合，制備成乳劑。通常，抗原濃度為1-2 mg/mL，CFA與抗原的體積比為1:1。02免疫注射將乳化后的抗原注射到動物背部皮下或尾根部。通常采用多點注射，每點注射50-100 µL，總劑量為100-200 µg/只。03PTx注射在免疫當天和免疫后48小時，分別注射PTx（200-500 ng/只，腹腔注射）。PTx的劑量需根據(jù)批次效價調(diào)整，以確保模型的一致性。 PART 03模型評估 01臨床評分從免疫后第7天開始，每天觀察動物的臨床癥狀，并按照標準評分系統(tǒng)進行評分。評分標準通常包括體重變化、尾部張力、后肢無力、前肢無力和癱瘓等。 02病理學檢測在發(fā)病高峰期（通常為免疫后第16-20天）處死動物，取腦和脊髓組織進行病理學分析。常用染色方法包括H&E染色（觀察炎癥細胞浸潤）和羅克沙爾堅牢藍染色（觀察脫髓鞘情況）。 03免疫學檢測通過流式細胞術(shù)或ELISA檢測外周血或中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的免疫細胞（如Th17細胞和Treg細胞）及其相關(guān)細胞因子（如IL-17和IL-10）。 |
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