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1073268128新蟲 (小有名氣)
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怎樣才能選到理想的多肽產(chǎn)品? 已有1人參與
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1. 分子量確認(rèn) · 看什么: 將實(shí)測(cè)分子量與理論分子量進(jìn)行對(duì)比。 · 如何判斷: · 理論分子量: 根據(jù)多肽的氨基酸序列計(jì)算得出(包括任何修飾)。 · 實(shí)測(cè)分子量: 在質(zhì)譜報(bào)告中找到主峰的質(zhì)荷比(m/z)。對(duì)于電噴霧質(zhì)譜,通常會(huì)看到一系列帶不同電荷的峰 [M+nH]ⁿ⁺,軟件會(huì)據(jù)此解卷積計(jì)算出完整的分子量。 · 合格標(biāo)準(zhǔn): 實(shí)測(cè)分子量與理論分子量的誤差應(yīng)在 10 ppm(百萬分之十) 以內(nèi)。對(duì)于小多肽(<5000 Da),誤差通常要求更。<5 ppm)。這是確認(rèn)身份的第一步。 2. 純度評(píng)估 · 看什么: 液相色譜圖。 · 如何判斷: · 在主峰對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間處,其峰面積占總峰面積的百分比即為純度。 · 研究人員會(huì)檢查色譜基線是否平穩(wěn),主峰是否尖銳、對(duì)稱。 · 他們會(huì)留意是否有明顯的雜質(zhì)峰,并關(guān)注雜質(zhì)峰的出現(xiàn)時(shí)間和面積。 · 合格標(biāo)準(zhǔn): 對(duì)于研究級(jí)多肽,純度通常要求 > 95%,高標(biāo)準(zhǔn)的要求 > 98%。雜質(zhì)可能包括: · 缺失序列: 合成過程中缺失了一個(gè)氨基酸的片段。 · 刪除序列: 合成過程中多了一個(gè)氨基酸的片段。 · 氧化/修飾產(chǎn)物: 如甲硫氨酸被氧化。 3. 序列確認(rèn) · 看什么: 串聯(lián)質(zhì)譜圖。 · 如何判斷: 這是最有力的證據(jù),直接“讀取”氨基酸序列。 · 質(zhì)譜儀會(huì)選擇主峰的離子(母離子),將其打碎,然后測(cè)量碎片離子的質(zhì)量。 · 多肽在碰撞池中會(huì)沿著肽鍵斷裂,產(chǎn)生一系列有規(guī)律的 b-離子(從N端開始)和 y-離子(從C端開始)。 · 通過分析相鄰b-離子或y-離子之間的質(zhì)量差,就可以推斷出是哪一個(gè)氨基酸。 · 質(zhì)量差 87 = Serine · 質(zhì)量差 128 = Glutamic Acid · ...以此類推 · 合格標(biāo)準(zhǔn): 能夠通過碎片離子質(zhì)量差,連續(xù)地、無歧義地匹配整個(gè)目標(biāo)序列。這被稱為“序列覆蓋度”,覆蓋度越高,信心越足。 |
金蟲 (正式寫手)

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